Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1 Генетически модифицированные организмы (определение, проблемы использования) .
1.2. Основные цели создания ГМ линий сельскохозяйственных растений 12
1.3. Классификация ГМО 15
1.4. Законодательство в сфере оборота и анализа ГМ продукции. Обзор линий ГМО, 15 разрешенных к применению в продуктах питания и кормах на территории Российской Федерации
1.5. Основные методы обнаружения ГМО 20
1.5.1. Физико-химические методы анализа (хроматография, спектрофотомтрия, 20 спектрофлюорометрия и др.) .
1.5.2. Иммуноферментный анализ 20
1.5.3. Методы, основанные на полимеразной цепной реакции 21
1.6. Типы ПЦР анализа образцов на наличие ГМО 24
1.7. Схема анализа ГМО методом ПЦР-РВ в России 26
1.8. Современное состояние использования ПЦР-РВ в диагностике ГМО 27
1.9. Мультиплексная (мультипраймерная) ПЦР 29
1.10. Другие методы определения ГМО, основанные на анализе ДНК 30
1.11. Диагностические системы для выявления ГМО 34
Глава 2. Материалы и методы 37
2.1. Конструирование, синтез и очистка праймеров и зондов для ПЦР-РВ 37
2.2. Полимеразная цепная реакция в реальном времени 40
2.3. Спектрофотометрическое определение концентрации нуклеиновых кислот 41
2.4. Биологический материал (стандарты, опытные образцы) 41
2.5. Определение процентного содержания чужеродной ДНК относительно геномной ДНК 43 растений
2.6. Методика приготовления калибровочных растворов на примере сои линии GTS 40-3-2 44 и кукурузы линии MON 810
2.7. Статистическая обработка результатов исследования 44
2.8. Получение плазмиды для внутреннего положительного контроля (клонирование) 44
Глава 3. Результаты исследований 48
3.1 Разработка метода и набора реагентов для выделения ДНК из растительного сырья и пищевых продуктов .
3.2 Разработка скрининговых методов выявления трансформационных событий
3.2.1 Разработка праймеров и зондов для обнаружения трансформационных событий методом ПЦР в реальном времени .
3.2.2. Выявление последовательностей генов устойчивости к фосфинотрицину - bar, pat и лифосату – epsps
3.2.3. Выявление растительной ДНК и ДНК сои 72
3.2.4. Разработка наборов реагентов для скринингового обнаружения промоторов 35S CaMV, Р-FMV и терминатора NOS
3.2.5. Разработка набора реагентов для скринингового обнаружения генов bar, pat и epsps методом ПЦР в реальном времени .
3.3. Разработка набора реагентов для обнаружения вируса мозаики цветной капусты и ромотора CaМV 35S методом ПЦР в реальном времени
3.4. Разработка набора реагентов для выявления ГМ рапса методом ПЦР в реальном времени
3.5. Разработка набора реагентов для количественного определения ДНК ГМ сои лини 98 GTS 40-3-2, устойчивой к глифосату методом ПЦР в реальном времени
3.6. Разработка набора реагентов для количественного определения ДНК ГМ кукурузы 103 линии MON 810, устойчивой к стеблевому мотыльку .
3.7. Пример исследования продуктов питания на содержание в них ДНК ГМО 109
Выводы 111
Список литературы
