Введение
1. Введение 5
2. Обзор литературы 12
2.1. Органы и ткани иммунной системы рыб 12
2.1.1. Почка 12
2.1.2. Тимус 14
2.1.3. Селезенка 17
2.1.4. Скопления лимфоцитов, ассоциированные со слизистыми оболочками внутренних органов 18
2.1.5. Ткань эпикарда 20
2.1.6. Краниальный гемопоэтический орган 20
2.1.7. Периферическая кровь 22
2.2. Клетки иммунной системы рыб 23
2.2.1. Гранулоциты 23
2.2.2. Макрофаги 24
2.2.3. Неспецифические цитотоксические клетки 25
2.2.4. Лимфоциты 26
2.3. Факторы гуморального иммунитета рыб 28
2.3.1. Факторы врожденного иммунитета 28
2.3.2. Факторы приобретенного иммунитета 34
2.4. Развитие иммунного ответа 39
2.4.1. Первичный и вторичный иммунный ответ, формирование специфической памяти 39
2.4.2. Трансплантационные реакции 43
2.4.3. Реакции гиперчувствительности 44
2.4.4. Противоопухолевая активность 45
2.5. Регуляция иммунной системы 45
2.6. Болезни рыб 54
2.6.1. Краткая характеристика болезней рыб 54
2.6.1.1. Инфекционные заболевания 55
2.6.1.2. Инвазионные заболевания 57
2.6.1.3. Болезни смешанного типа 58
2.6.2. Методы профилактики и лечения заболеваний рыб 59
2.6.2.1. Использование химиотерапевтических препаратов 59
2.6.2.2. Вакцинация 62
2.6.2.3. Пассивная иммунизация 64
2.6.2.4. Повышение иммунитета путем селекции 64
3. Цель и задачи исследования 66
4. Объекты и методы исследования 67
4.1. Объекты 67
4.1.1. Радужная форель Salmo gairdneri (Richardson, 1836) 67
4.1.2. Северная навага Eleginus navaga (Pallas, 1811) 67
4.1.3. Беломорская треска Gadus morhua maris-albi (Derjugin, 1920) 67
4.2. Методы 67
4.2.1. Отлов и содержание морских рыб 67
4.2.2. Клинический осмотр рыб 68
4.2.3. Вскрытие рыб и осмотр при вскрытии 68
4.2.4. Бактериологическое исследование 68
4.2.5. Паразитологическое исследование 69
4.2.6. Взятие крови и получение сыворотки 69
4.2.7. Подсчет форменных элементов крови 69
4.2.8. Определение скорости оседания эритроцитов 70
4.2.9. Определение концентрации гемоглобина в крови 70
4.2.10. Определение цветного показателя крови 70
4.2.11. Двуступенчатый электрофорез сывороток крови рыб в полиакриламидном геле, содержащем додецил-сульфат натрия, в восстанавливающих условиях 71
4.2.12. Компьютерная обработка электрофореграмм 71
4.2.13. Определение концентрации лизоцима в сыворотке 73
4.2.14. Выделение иммуноглобулинов 74
4.2.15. Определение концентрации белка по методу Бредфорд 74
4.2.16. Спектрофотометрическое определение концентрации белка 75
4.2.17. Получение антисыворотки 75
4.2.18. Получение разрушенных клеток бактерий 75
4.2.19. Твердофазный иммуноферментный анализ 76
4.2.19.1. Непрямой твердофазный ИФА для тестирования антисыворотки кролика к иммуноглобулинам рыб 76
4.2.19.2. Прямой твердофазный ИФА для стандартизации рабочего разведения конъюгата 78
4.2.19.3. Непрямой твердофазный ИФА для стандартизации рабочей концентрации иммуноглобулинов кролика 78
4.2.19.4. Непрямой твердофазный ИФА для стандартизации рабочего разведения клеток бактерий 78
4.2.19.5. Непрямой твердофазный ИФА для стандартизации рабочей концентрации разрушенных ультразвуком клеток бактерий 78
4.2.19.6. Непрямой твердофазный ИФА для определения взаимодействия сывороток рыб с поверхностными антигенами бактерий 79
4.2.19.7. Непрямой твердофазный ИФА для определения взаимодействия сывороток рыб с антигенами разрушенных ультразвуком клеток бактерий 79
4.2.19.8. Получение данных с помощью компьютера 79
4.2.20. Статистическая обработка данных 80
5. Экспериментальные результаты и их обсуждение 81
5.1. Исследование параметров врожденного иммунитета радужной форели, наваги и трески в зависимости от инфекции и зараженности паразитами 82
5.1.1. Изучение иммунологических и гематологических показателей радужной форели при энтерите и исследование действия лекарственных препаратов 83
5.1.1.1. Клинический осмотр и патологоанатомическое исследование 86
5.1.1.2. Бактериологический анализ 89
5.1.1.3. Паразитологический анализ 89
5.1.1.4. Изучение гематологических показателей 89
5.1.1.5. Сравнение электрофореграмм сывороток рыб 92
5.1.1.6. Определение концентрации лизоцима в сыворотках рыб 94
5.1.2. Исследование зависимости иммунологических и гематологических показателей наваги и трески Белого моря от зараженности паразитами 97
5.1.2.1. Морфологические параметры рыб 99
5.1.2.2. Показатели зараженности рыб скребнем Echinorhynchus gadi 102
5.1.2.3. Бактериологический анализ 104
5.1.2.4. Изучение гематологических показателей 104
5.1.2.5. Определение концентрации белка в сыворотках рыб 110
5.1.2.6. Сравнение электрофореграмм сывороток рыб 112
5.1.2.7. Определение концентрации лизоцима в сыворотках рыб 112
5.2. Исследование специфического иммунитета радужной форели 118
5.2.1. Оптимизация метода твердофазного иммуноферментного анализа и экспериментальная разработка тест-системы для изучения специфического взаимодействия сывороток рыб с возбудителями заболеваний 120
5.2.1.1. Выделение иммуноглобулинов из сыворотки рыб 121
5.2.1.2. Получение поликлональной антисыворотки и поликлональных антител кролика к иммуноглобулинам рыб 123
5.2.1.3. Подбор условий для проведения твердофазного ИФА 125
5.2.2. Применение метода твердофазного иммуноферментного анализа для определения специфического взаимодействия сывороток рыб с возбудителями энтерита радужной форели 133
6. Заключение 137
