Введение
1 Обзор литературы 14
1.1 Общая характеристика NO-пути в сосудах 14
1.1. Синтез и механизм действия оксида азота 14
1.1.2 Строение и принцип работы эндотелиальной NO-синтазы 15
1.1.3 Регуляция работы eNOS 16
1.1.3.1 Регуляция на транскрипционном и посттранскрипционном уровнях 17
1.1.3.2 Другие механизмы долговременной регуляции eNOS 18
1.1.3.3 Механизмы кратковременной регуляции активности eNOS 20
1.2 Регуляция активности eNOS половыми гормонами 22
1.2.1 Локальный синтез и рецепторы эстрогенов в сосудистой системе 22
1.2.2 Влияние эстрогенов на экспрессию eNOS 24
1.2.3 Влияние эстрогенов на активность eNOS 25
1.3 Регуляция активности eNOS тиреоидными гормонами 28
1.3.1 Синтез тиреоидных гормонов и их рецепторы 29
1.3.2 Влияние тиреоидных гормонов на активность и экспрессию eNOS в
эндотелии сосудов 31
1.3.3 Взаимосвязь регуляторных влияний половых и тиреоидных гормонов 33
1.4 Изменения активности NO-пути в раннем постнатальном онтогенезе 34
2 Материалы и методы 40
2.1 Экспериментальные животные 40
2.1.1 Общая характеристика экспериментальных групп 40
2.1.2 Хроническая блокада эстрогеновых рецепторов типа / и ароматазы в раннем постнатальном периоде 41
2.1.2.1 Характеристика препаратов 41
2.1.2.2 Протокол введения 42
2.1.3 Модель антенатального гипотиреоза 42
2.1.3.1 Характеристика препарата 43
2.1.3.2 Протокол введения 43
2.2 Эксперименты in vivo 44 2.2.1 Изготовление катетеров 44
2.2.2 Вживление катетеров 45
2.2.3 Установка для измерения артериального давления 46
2.2.4 Исследование реакций на метоксамин и L-NAME 46
2.2.5 Обработка результатов 47
2.3 Определение показателей крови 48
2.3.1 Получение сыворотки крови 48
2.3.2 Определение содержания гормонов методом иммуноферментного анализа 48
2.3.3 Протокол измерения содержания метаболитов NO в образцах сыворотки крови 49
2.4 Эксперименты на изолированных сосудах 50
2.4.1 Объекты исследования 50
2.4.2 Исследование сокращения в изометрическом режиме 51
2.4.2.1 Нормализация (определение оптимального растяжения сосуда) 52
2.4.2.2 Активация препарата 53
2.4.2.3 Фармакологические агенты, использовавшиеся в экспериментах на изолированных сосудах 54
2.4.2.4 Протоколы экспериментов 56
2.4.2.4.1 Протокол экспериментов по исследованию блокады продукции оксида азота в эндотелии 56
2.4.2.4.2 Протокол экспериментов по исследованию чувствительности гладкой мышцы артерий к донору оксида азота 57
2.4.2.4.3 Обработка результатов 58
2.5 Исследование уровня экспрессии мРНК методом полимеразной цепной реакции 2.5.1 Приготовление образцов мРНК 60
2.5.2 Синтез комплементарной ДНК 61
2.5.3 Количественная ПЦР или ПЦР в реальном времени 62
2.5.4 Обработка результатов количественной ПЦР 63
2.6 Статистическая обработка результатов 63
3 Результаты 65
3.1 Исследование активности NO-пути у 2-недельных и взрослых крыс на системном уровне 65
3.1.1 Изменения параметров системной гемодинамики после блокады NO-синтазы
3.1.2 Содержание продуктов метаболизма NO в крови 67
3.2 Исследование активности NO-пути в резистивных артериях различных органов у крыс разного возраста 68
3.2.1 Изменение диаметра и сократимости артерий с возрастом 68
3.2.2 Влияние блокады продукции NO на сократительные ответы артерий брыжейки 69
3.2.3 Влияние блокады продукции NO на сократительные ответы подкожной артерии 70
3.2.4 Влияние блокады продукции NO на сократительные ответы артерии икроножной мышцы 74
3.2.5 Влияние блокады продукции NO на сократительные ответы артерий почки 76
3.2.6 Чувствительность гладкой мышцы артерий различных органов к NO 78
3.2.7 Уровни экспрессии мРНК eNOS и аргиназы-2 в артериях различных органов
3.2.8 Заключение по результатам исследования активности NO-пути в артериях крыс разного возраста 82
3.3 Исследование влияния эстрогенов на NO-зависимую регуляцию тонуса артерий в раннем постнатальном онтогенезе 83
3.3.1 Сравнительный анализ состояния эстрогеновой системы у 2-недельных и взрослых крыс 83
3.3.1.1 Содержание половых гормонов в сыворотке крови 2-недельных и взрослых крыс 83
3.3.1.2 Уровни экспрессии мРНК -типа эстрогеновых рецепторов в артериях 84
3.3.2 Исследование эффектов хронической блокады эстрогеновых рецепторов типа
/ на активность NO-пути в артериях 2-недельных крыс 85
3.3.2.1 Влияние блокады ER/ на реакции подкожной артерии 86
3.3.2.2 Влияние блокады ER/ на реакции артерий брыжейки 88
3.3.2.3 Влияние хронической блокады ER/ на содержание метаболитов NO в крови 2-недельных крыс 89
3.3.3 Уровни экспрессии мРНК мембранного рецептора GPR30 в артериях 2 недельных и взрослых крыс 90
3.3.4 Исследование эффектов хронической блокады ароматазы на активность NO пути в артериях 2-недельных крыс 91
3.3.4.1 Влияние хронической блокады ароматазы на содержание метаболитов NO в крови 2-недельных крыс 92
3.3.4.2 Влияние блокады ароматазы на реакции подкожной артерии 92
3.4. Исследование влияния тиреоидных гормонов на NO-зависимую регуляцию тонуса артерий в раннем постнатальном онтогенезе 95
3.4.1 Сравнительный анализ продукции и рецепции тиреоидных гормонов у 2 недельных и взрослых крыс 95
3.4.1.1 Содержание тиреоидных гормонов в сыворотке крови 95
3.4.1.2 Уровни экспрессии мРНК генов, регулирующих влияние тиреоидных гормонов в артериях 96
3.4.2 Эффекты блокады синтеза тиреоидных гормонов на беременных самок и их потомство 98
3.4.3 Эффекты антенатального гипотиреоза на активность NO-пути в артериях 2-недельных крыс 102
3.4.3.1 Влияние блокады синтеза тиреоидных гормонов на реакции подкожной артерии и артерий брыжейки 102
3.4.4 Влияние блокады синтеза тиреоидных гормонов на экспрессию генов в стенке артерий 107
4 Обсуждение результатов 109
4.1 Основные результаты исследования 109
4.2 Активность NO-пути выше в организме 2-недельных крыс по сравнению со взрослыми 109
4.2.1 Антиконстрикторный эффект NO присутствует во многих сосудистых регионах 2-недельных крыс и уменьшается при взрослении 109
4.2.2 Уровни экспрессии аргиназы-2 в артериях 2-недельных крыс ниже, чем у взрослых 114 4.2.3 Изменения активности NO-пути у 2-недельных крыс на системном уровне 116
4.3 Влияние эстрогенов на NO-зависимую регуляцию тонуса артерий в раннем постнатальном онтогенезе 119
4.4 Влияние тиреоидных гормонов на NO-зависимую регуляцию тонуса артерий в раннем постнатальном онтогенезе 122
Заключение 126
Выводы 128
Список использованной литературы 129
