Введение
1 Регенерация у позвоночных животных 11
1.1 Определение и виды регенерации 11
1.2 Модели исследования регенерации и перспективы регенеративной биологии и медицины 12
1.3 Преимущества хвостатых амфибий как объекта для исследования механизмов регенерации; модель регенерации хвоста
2 Ход регенерации хвоста тритона 14
3 Роль раневого эпидермиса в регенерации 17
4 Роль бластемы в регенерации
4.1 Клеточные источники формирования бластемы и их потенции 19
4.2 Регуляция образования, пролиферации и дифференцировки бластемы 21
5 Регенерация мышц 24
5.1 Тканевая регенерация и резервные клеточные популяции 25
5.2 Эпиморфная регенерация и дедифференцировка мышечных волокон 26
6 Регенерация нервной системы 27
6.1 Потенции эпендимных клеток 29
6.2 Регуляторная роль эпендимных клеток 30
7 Механизмы регуляции морфогенеза хвоста 34
7.1 Передне-задняя полярность 34
7.2 Дорсовентральная полярность 35
7.3 Эпигенетические регуляторы регенерации и морфогенеза 37
8. Белки теплового шока как факторы, участвующие в процессах развития и регенерации 38
8.1 Белки теплового шока в развитии амфибий 39
8.2 Белки теплового шока в регенерации 41
9 Амфибии как модельный объект гравитационной биологии развития 42
9.1 Гравитационная биология развития Xenopus leavis 42
9.2 Гравитационная биология развития Pleurodeles waltl 44
9.3 Регенерация Pleurodeles waltl в условиях космического полета и измененной гравитационной
нагрузки 45
9.4 Примеры молекулярных эффектов измененной гравитационной нагрузки
Материалы и методы 50
1 Содержание животных и операции 50
1.1 Общие принципы 50
1.2 Содержание животных на субстрате 50
1.3 Тепловой шок
2 Морфометрическое изучение регенератов хвоста 51
3 Эксперименты по исследованию обратимости морфогенетического эффекта 53
4 Морфологическое изучение регенератов хвоста 54
5 Изучение пролиферативной активности клеток в регенератах хвоста 54
6 Изучение апоптоза в регенератах хвоста 55
7 Ингибирование сигнального пути Shh
7.1 Введение фармакологических агентов в среду 57
7.2 Внутрибрюшинное введение фармакологических агентов 8 Ингибирование белков теплового шока 58
9 Изучение экспрессии генов Hsp70 и Hsp90 с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР)
9.1 Подготовка образцов кДНК 61
9.2 Полуколичественная ПЦР 62
9.3 Количественная ПЦР в реальном времени 63
10 Иммуногистохимическое определение экспрессии белков HSP70 и HSP90 в тканях регенерирующего хвоста 65
Результаты и их обсуждение 69
1 Морфометрические исследования регенератов хвоста в двух группах 69
1.1 Воспроизведение эффекта измененного морфогенеза при содержании на субстрате 69
1.2 Изучение темпов регенерации при содержании в аквариуме и на субстрате 73
1.3 Проверка обратимости изменения формы регенерата при содержании на субстрате 77
2 Проявление эффекта загиба хвоста при регенерации с перегрузкой 2g 80
3 Изучение тканевых и клеточных аспектов измененного морфогенеза регенерирующего хвоста на субстрате 83
3.1 Морфологическое изучение регенератов хвоста в аквариуме и на субстрате 83
3.2 Изучение пролиферативной активности клеток регенерата 89
3.3 Изучение локализации апоптоза в регенерирующих тканях
4 Исследование роли сигнального пути Shh в изменении морфогенеза хвоста 98
5 Морфогенетический эффект теплового шока при регенерации хвоста 103
6 Ингибирование белков теплового шока 107
7 Изучение экспрессии генов теплового шока и локализации соответствующих белков в тканях 111 7.1 Изучение экспрессии генов теплового шока Hsp70 и Hsp90 методом ПЦР 111
7.2 Изучение экспрессии генов теплового шока Hsp70 и Hsp90 методом ПЦР-РВ 113
7.3 Изучение локализации белков теплового шока HSP70 и HSP90 116
Заключение 123
Выводы 128
Список литературы 129
