Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1. Активация, дифференцировка и свойства моноцитов и макрофагов (Мф) 14
1.2. TLR/RLR-рецепторы и их сигнальные реакции
1.3 Антивирусные препараты с иммуномодулирующей активностью 33
1.4 Гриппозная инфекция в иммунокомпетентных клетках 44
1.5 Иммунное узнавание вирусов гриппа А 54
1.6 Противогриппозные вакцины – активаторы сигнальных реакций врождённого иммунитета 62
1.7 Заключение 65
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 67
Материалы 67
2.1. Препараты и TLR-агонисты 67
2.2 Факторы клеточной пролиферации и дифференцировки 68
2.3 Гриппозные вакцины 68
2.4 Вирусы гриппа А 69
2.5 Клетки крови и клеточные культуры 70
2.6 Химические реактивы 71
2.7 Олигонуклеотидные ПЦР-праймеры 72
Методы исследования 72
2.8 Дифференцировка моноцитов в макрофаги (Мф) in vitro 72
2.9 Обработка ТНР-макрофагов TLR –агонистами 2.10 Постановка опытов с противогриппозными вакцинами на клетках крови и ТНР-1. 73
2.11 Заражение клеток вирусами гриппа А 74
2.12 Титрование инфекционности вирусов гриппа А 74
2.13 Количественное определение экспрессии генов 75
2.14 Методы количественной иммунометрии 77
2.15 Лабораторное оборудование 78
ГЛАВА 3. Результаты исследований 80
3.1. Стимуляция интерферонами (ИФН), ИФН-индукторами и иммуномодуляторами сигнальных TLR/RLR-реакций в клетках человека 80
3.1.1 Сравнение уровней экспрессии TLR/RLR-генов в клетках моноцитарной лейкемии ТНР-1 и аденокарциномы толстого кишечника 80
3.1.2 Сигнальные механизмы действия Ридостина в опухолевых клетках 83
3.1.3 Влияние препаратов на СD-фенотипы клеток ТНР-1 84
3.1.4 Сигнальные механизмы иммуномодулирующего и антивирусного действия препаратов Ингавирин и Тимоген в клетках крови и ТНР-1 86
3.2. TLR/RLR-механизмы дифференцировки моноцитов в макрофаг-подобные клетки in vitro.. 90
3.2.1. Индукция дифференцировки ТНР-1 моноцитов комплексом митогенов 90
3.2.2 Активность и дифференцировка ТНР-1 моноцитов обработкой форбол-миристат-ацетатом (РМА) 94
3.2.3 Действие TLR/RLR-агонистов на ТНР-РМА дифференцированные макрофаги 97
3.2.4 Индивидуальные TLR/RLR-реакции моноцитов крови доноров на гранулоцитмакрофаг-колониестимулирующий фактор (GM-CSF) 100
3.3. Взаимодействие вирусов гриппа А с иммунокомпетентными клетками 102
3.3.1 Инфекция лимфоцитов крови доноров рекомбинантным вирусом гриппа A/PR8
H1N1/ H5N1 и его «эскейп» мутантом m13(13) 103
3.3.2. Инфекция пандемическим «свиным» вируса гриппа А H1N1 (Москва, 2009)
моноцитарных GM-макрофагов 110
3.3.3 Чувствительность ТНР-1 моноцитов к пандемическому «свиному» вирусу H1N1 (Москва, 2009) 115
3.3.4 Абортивная инфекция ТНР-РМА макрофагов вирусами гриппа подтипов Н1, Н5 и Н9 117
3.4. Иммунные сигнальные механизмы действия противогриппозных вакцин «Гриппол», « Инфлювак» и «Ваксигрип» 126
3.4.1. Стимуляция экспрессии генов врождённого и адаптивного иммунитета вакцинами 127
3.4.2. Цитокиновый ответ клеток крови на вакцины 130
Глава 4. Обсуждение 132
Выводы 151
Приложение 152
Список литературы 156
