Введение
3.Обзор литературных данных 13
3.1 Волосяной фолликул 13
3.2 Клетки дермальной папиллы в контексте дермы 20
3.3 Особенности клеток дермальной папиллы 26
3.4 Моделирование фолликулярных взаимодействий в культуре 32
4.Материалы и методы 36
4.1. Клеточные культуры 36
4.1.1 Первичные клеточные культуры человека 36
4.1.1.1 Выделение и культивирование клеток дермальной папиллы 36
4.1.1.2 Выделение и культивирование кератиноцитов 36
4.1.1.3 Выделение и культивирование дермальных фибробластов 37
4.1.1.4 Культивирование фибробластов легкого 37
4.1.2 Первичная культура клеток мыши 37
4.1.2.1Выделение и культивирование клеток дермальной папиллы вибрисс мыши 38
4.1.2.2Выделение и культивирование дермальных фибробластов мыши 38
4.1.3 Культивирование стабильных клеточных линий 38
4.1.3.1Культивирование Mcf7 38
4.1.3.2 Культивирование ИПСК 39
4.2. Лентивирусная трансфекция 39
4.3. Совместное культивирование 39
4.3.1 Кокультивирование клеток кератиноцитов с клетками дермальной папиллы или дермальными фибробластами на пластике 39
4.3.2 Кокультивирование кератиноцитов и клеток дермальной папиллы в системе TransWell 39
4.3.3 Получение агрегатов 40
4.3.4 Совместное культивирование клеток линии Mcf7 с клетками дермальной папиллы или дермальными фибробластами 40
4.4. Культивирование с добавлением факторов роста, цитокинов и специализированного матрикса 41
4.5. Культивирование в гелеобразных матриксах 42
4.5.1 Культивирование в коллагеновом геле 42
4.5.2 Культивирование в гиалуроновой кислоте 42
4.5.3 Культивирование в гидрогеле 42
4.6. Культивирование клеток в провоспалительных условиях 42
4.7. Дифференцировка плюрипотентных клеток в направлении дермальной папиллы 43
4.8. Определение активности щелочной фосфатазы 43
4.9. Иммунохимическое окрашивание 44
4.10. Выделение РНК, обратная транскрипция и ПЦР в реальном времени 47
4.11. Обработка фотографий и статистика 49
5.Результаты и обсуждение 50
5.1 Совместное культивирование клеток дермальной папиллы и кератиноцитов в двумерных условиях 50
5.2 Совместное культивирование клеток дермальной папиллы и кератиноцитов в трехмерной системе 53
5.3 Миграция клеток дермальной папиллы в контексте взаимодействия с кератиноцитами 60
5.4 Совместное культивирование Mcf7 и клеток дермы 63
5.5 Экспрессия специфических маркеров в смешанных агрегатах 65
5.6 Влияние индуцирующих свойств клеток дермальной папиллы на формирование смешанных агрегатов 67
5.7 Сохранение индуцирующих свойств клеток дермальной папиллы 69
5.8 Культивирование смешанных агрегатов в гелеобразном субстрате 76
5.9 Определение способности клеток дермальной папиллы и дермальных фибробластов к активации в провоспалительных условиях 79
5.10 Получение клеток дермальной папиллы из плюрипотентных клеток 84
6. Заключение 88
7.Выводы 93
8.Список используемых сокращений 94
9. Список цитируемой литературы 95
