Введение
Обзор литературы 11
Мезенхимальные стромальные/стволовые клетки. Общие положения. 11
Тканевые источники и гетерогенность МСК 13
Тканевая ниша МСК. Уровень кислорода 15
Старение организма и старение клетки 18
Инициаторы клеточного старения 23
Механистические теории старения 25
Теломерная теория 26
Свободно-радикальная теория 29
Митохондриальная теория старения 31
Свободно-радикальная митохондриальная теория 33
Положительные эффекты клеточного старения 35
Старение МСК 36
Материалы и методы 41
Химические реагенты 41
Материалы 42
Оборудование 42
Выделение МСК 43
Криоконсервация МСК 43
Длительное культивирование МСК при различном содержании кислорода 44
Иммунофенотипирование МСК 45
Число удвоений популяции 46
Распределение популяций МСК по фазам клеточного цикла 46
Колониеобразующие единицы 47
Экспрессия р-галактозидазы, ассоциированной со старением 47
Распределение популяций МСК по размеру и гранулярности 47
Жизнеспособность 48
Дифференцировка в остеогенном и адипогенном направлениях 48
Состояние внутриклеточных органелл 49
Конфокальная микроскопия 50
Окислительный стресс в клетке 50
Иммуноферментный анализ 51
Количественный ПЦР анализ 51
Статистическая обработка 52
Результаты и обсуждение 53
Феноменологические признаки сенесцентного состояния 53
Количество удвоений клеточной популяции 53
Жизнеспособность 56
Пролиферативная активность 59
Активность ассоциированной со старением -галактозидазы 63
Морфология 67
Характеристика МСК при длительном культивировании 70
Иммунофенотип 70
Потенциал к дифференцировке 70
Характеристика состояния клеточных органелл и уровня окислительных процессов 76
Митохондрии 76 АФК 78
Лизосомы 80
Паракринные медиаторы 83
Транскрипционная активность генов, ассоциированных со старением и реакцией на гипоксию 88
Экспрессия генов, ассоциированных со старением 88
Экспрессия генов, ассоциированных с реакцией на гипоксию 95
Заключение 100
Выводы 104
Список литературы 105
