Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Иммунная система и опухоль 11
1.1.1. Общая характеристика опухолевых клеток, их особенности 11
1.1.2. Классификация опухолей 18
1.1.3. Компетентность иммунной системы в отношении опухолей 20
1.1.4. Способы избегания клетками опухоли надзора иммунной системы 25
1.1.5. Влияние опухоли на компоненты иммунной системы 26
1.1.6. Теории взаимодействия опухоли и иммунной системы. Роль стромы опухоли 29
1.2. Полиморфноядерные нейтрофильные гранулоцити (нейтрофилы) 37
1.2:1. Общая характеристика 37
1.2.2. Мембранные рецепторы нейтрофилов 40
1.2.3. Респираторный взрыв и его регуляция 42
1.2.3.1. Структура NADPH оксидазы 43
1.2.3.2. Активация NADPHоксидазы, сигнализация 47
1.3. Двойственное поведение активных форм кислорода (АФК) 50
1.3.1. Характеристика А ФК 50
1.3.2. Системы генерации и инактивации активных форм кислорода 51 /. 3.3. А ФК - польза или вред? 53
1.3.4. Участие АФК в процессах канцерогенеза 54
7.3.4. Влияние активных форм кислорода на сигнальные системы 55
1.4. Неоднозначность роли нейтрофила в канцерогенезе 5 8
1.4.1. Антиопухолевая активность 58
1.4.2. Проопухолевая активность 59
Глава 2. Материалы и методы исследования 64
2.1. Материалы 64
2.2. Биологический объект 64
2.2.1. Изоляция перитонеалъных нейтрофилов мыши 64
2.2.2. Подготовка проб крови 65
2.3. Модель экспериментальной опухоли 65
2.3.1. Линии клеток 65
2.3.2. Формирование солидной формы опухоли 65
2.4. Регистрация хемилюминесценции 66
2.4.1. Хемилюминометр, программы и режим измерения 66
2.4.2. Измерение хемилюминесценции цельной крови 66
2.4.3. Измерение хемилюминесценции изолированных клеток 66
2.5. Микроскопия клеток 67
2.6. Гистологический анализ тканей 68
2.7. Анализ спектра белков методом электрофореза 68
2.8. Обработка результатов 69
Глава 3. Результаты 70
3.1. Модель экспериментальной опухоли на мышах 70
3.2. Оценка статуса лейкоцитов периферической крови 72
3.2.1. Популяционный состав клеток крови 72
3.2.2. Продукция А ФК клетками крови 13
3.3. Анализ клеток, изолированных из очага острого воспаления 74
3.4. Морфологические изменения нейтрофилов 75
3.5. Функциональные изменения нейтрофилов 11
3.5.1. Оценка адгезивных свойств 11
3.5.2. Продукция А ФК периферическими нейтрофилами мыши 78
3.5.2.1. Спонтанная продукция АФК 78
3.5.2.2. Активированная ФМЛФ продукция А ФК 79
3.5.2.3. Оценка вклада отдельных активных форм кислорода в спонтанную и активированную продукцию АФК 81
3.6. Ингибиторный анализ регуляции респираторного взрыва нейтрофилов 84
3.6.1. Оценка вклада рецепторов ФМЛФ с разным сродством в инициацию респираторного взрыва 84
3.6.2. Ингибирование киназ 86
3.6.2.1.Действие тирфостина 51, ингибитора тирозиновых протеинкиназ
3.6.2.2. Влияние GF109203Х, ингибитора протеинкиназы С 88
3.6.2.3. Действие SB 203508, ингибитора р38 МАРК 89
3.6.2.4. Действие вортманнина и LY294002, ингибиторов фосфатидилинозит-3-киназы 90
3.6.2.5. Влияние ортованадата натрия, ингибитора тирозиновых протеинфосфатаз 92
3.7. Оценка количества и спектра белков периферических нейтрофилов 94
3.7.1. Роль синтеза белка в способности нейтрофилов продуцировать АФК 94
3.7.2. Количество и спектр белков в цитоплазматической и ядерной фракциях 95
3.8. Сравнение функциональной активности нейтрофилов на моделях солидных опухолей 96
Глава 4. Обсуждение результатов 102
Выводы 113
Список литературы
