Введение
Глава 1. Ответ бактерий Escherichia coli на температурные стрессы 11
1.1. Влияние температуры на рост и развитие микроорганизмов 11
1.2. Ответ бактерий Е. coli на тепловой шок
1.2.1. Влияние теплового шока на структуру и функции мембран 14
1.2.2. Влияние теплового шока на ДНК 15
1.2.3. Белки теплового шока: характеристика и функции 16
1.2.4. Регуляция ответа на тепловой шок у Е. coli 1.3. Ответ на тепловой шок у других микроорганизмов 23
1.4. Ответ Е. coli на холодовой шок 24
1.5. Ответ Е. coli на воздействие этанолом 26
Глава 2. Ответ Е. coli на окислительный стресс 27
2.1. Реактивные формы кислорода и их токсическое действие на живые клетки 27
2.2. Регуляция ответа Е. coli на окислительный стресс 2.2.1. Ответ на действие перекиси водорода, роль oxyR регулона 31
2.2.2. Роль rpoS (katF) регулона в защите клеток от окислительного стресса 32
2.2.3. Ответ на действие генераторов супероксид аниона, роль soxRS регулона 33
2.3. Роль глутатиона в ответе Е. coli на окислительный стресс 35
2.3.1. Клеточные функции глутатиона 35
2.3.2. Ферменты биосинтеза глутатиона 39
2.3.3. Глутатионоксидоредуктаза 40
2.3.4. у-Глутамилтранспептидаза. 41
2.3.5. Глутатион-8-трансфераза .43
2.4. Проявление признаков, характерных для окислительного стресса, при тепловом шоке клеток разных типов 43
Глава 3. Объекты и методы исследований 45
3.1. Бактериальные штаммы 45
3.2. Питательная среда и условия культивирования 47
3.3. Определение содержания белковых и небелковых тиолов 48
3.4. Определение содержания внутриклеточного глутатиона 49
3.5. Определение активности глутатионредуктазы 51
3.6. Определение активности каталазы 53
3.7. Определение активности Р-галактозидазы 56
3.8. Определение содержания ионов калия в клетке 56
3.9. Определение содержания белка 58
3.10. Статистическая обработка данных 58
Глава 4. Роль антиоксидантных систем в отклике бактерий Е. coli на тепловой шок 60
4.1. Влияние теплового шока на рост Е. coli, несущих мутации в антиоксидантных генах... 60
4.2. Влияние теплового шока на активность антиоксидантных систем 62
4.2.1. Экспрессия генов katG и katE и активность каталазы 63
4.2.2. Экспрессия генов sodA и soxS 67
4.2.3. Уровни внутри- и внеклеточного глутатиона 71
4.2.4. Экспрессия гена gor и активность глутатионредуктазы 78
4.3. Влияние обработки этанолом на рост, уровни небелковых тиолов и калия у Е. coli, несущих мутации в антиоксидантных генах 81
Глава 5. Роль антиоксидантных систем в отклике бактерий Е. coli на холодовой шок 87
5.1. Влияние холодового шока на рост Е. coli, несущих мутации в антиоксидантных генах 87
5.2. Влияние холодового шока на активность антиоксидантных систем 89
5.2.1. Экспрессия генов katG и katE и активность каталазы 89
5.2.2. Экспрессия генов sodA и soxS 93
5.2.3. Уровни внутри- и внеклеточного глутатиона 96
5.2.4. Экспрессия гена gor и активность глутатионредуктазы 100
Заключение 103
Выводы 110
Список литературы 1
