Введение
ГЛАВА 1. Введение 5
1.1 Актуальность проблемы 5
1.2 Цели и задачи 8
ГЛАВА 2. Обзор литературы , 9
2.1 Белки SMC семейства 9
2.2 Конденсин 11
2.2.1 Конденсин: структура 11
2.2.2 Конденсин: локализация в клетке, связывание с ДНК 14
2.2.3 Конденсин: функции - компактизация 19
2.2.4 Конденсин: функции - сегрегация хроматид 21
2.2.5 Конденсин: функции - регуляция клеточного цикла 22
2.2.6 Конденсин: функции - регуляция транскрипции 25
2.3 рДНК, ядрышко, ядрышковый организатор 26
2.4 Регуляция биосинтеза рибосом: TOR, рапамицин 32
2.5 Штаммы с изменённой рибосомной ДНК 33
ГЛАВА 3. Материалы и методы 37
3.1 Штаммы 37
3.2 Плазмиды 37
3.3 Среды и условия культивирования 37
3.4 Молекулярно-биологические и биохимические методы 41
3.5 Тест на стабильность хромосомы III 43
3.6 Минихромосомы 43
3.7 Тест на потерю минихромосом 44
3.8 Микроскопия 45
3.9 Микроскопия живых клеток в реальном времени 46
ГЛАВА 5. Результаты 47
5.1 Значение ядрышкового организатора в контроле продолжительности и динамики анафазы дрожжей 47
5.1.1 Штаммы с эписомной рДНК имеют высокий уровень генетической нестабильности 47
5.1.2 Отсутствие хромосомного локуса рДНК повышает уровень успешной сегрегации ядрышка в мутантах smc2-8 49
5.1.3 Возможный механизм нестабильности генома в штамме с ЭрДНК: повышенная чувствительность к функциональности митотического веретена и кинетохора 52
1.4.1 Анализ динамики митоза (телофаза+анафаза) в штаммах с различной структурой рДНК 53
5.2 Функциональное и физическое взаимодействие конденсина с ДНК ядрышкового организатора 57
5.2.1 Активность Pol I необходима для выхода конденсина из ядрышка по окончании митоза 57
5.2.2 Транскрипционный статус рДНК связан с повышением частоты ошибок сегрегации ядрышка при активации мутации конденсина 60
5.2.3 Стабильность минихромосомы, содержащей мономер рДНК, зависит от функционального состояния рДНК (активности Pol I) и мутации конденсина 62
5.2.4 Транскрипция РНК-полимеразой II не оказывает дестабилизирующего действия на минихромосому, содержащую рДНК 66
2.5 Исследование митотической стабильности минихромосом, содержащих двойной повтор рДНК 69
5.3 Определение стабильности минихромосом, содержащих последовательности связьшания конденсина in situ 71
ГЛАВА 6. Обсуждение 77
6.1 Транскирипция Рої I и связывание конденсина на рДНК 77
6.2 Роль рДНК в процессе регуляции точности расхождения хромосом в митозе 81
6.3 Скрининг индивидуальных сайтов связьшания конденсина в геноме S. cerevisiae с использованием модели митотической сегрегации минихромосом 83
Выводы 86
Список цитированной литературы
