Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1 Введение 14
1.2 Структуры основных парамагнитных интермедиатов пероксидазы хрена 16
1.3 Окисление изобутиральдегида пероксидазой хрена в условиях инициирования перекисью водорода/надкислотами 18
1.4 Окисление НАДН, катализируемое пероксидазой хрена в отсутствии перекиси водорода 20
1.5 Процесс окисления НАДН пероксидазой хрена в колебательной пероксидазно-оксидазной реакции 23
1.6 Свободные радикалы в биологических системах. Применение методов спиновой химии для исследования ферментативных процессов 27
1.7 Исследование влияния магнитного поля на процесс окисления 2-метил-1-(триметилсилилокси)проп-1-ена пероксидазой хрена 29
1.8 Исследование влияния магнитного поля на процесс окисления НАДН пероксидазой хрена в колебательной пероксидазно-оксидазной реакции..35
1.9 Теория магнитных и спиновых эффектов в ферментативных многоспиновых системах 40
Глава 2. Экспериментальная часть 51
2.1 Методы исследования 51
2.1.1 Установка остановленной струи для исследования кинетики быстрых ферментативных процессов 51
2.1.2 Установка для регистрации эффектов химической поляризации ядер с временным разрешением 53
2.1.3 рН-и спектрофотометрия 56
2.1.4 Спектрофлуориметрия 56
2.2 Методика приготовления образцов 57
2.2.1 Магнитный эффект в реакции окисления НАДН, катализируемой пероксидазой хрена 57
2.2.2 Магнитный эффект в реакции окисления нифедипина, катализируемой пероксидазой хрена 57
2.2.3 Исследование фотоокисления НАДН, катализируемого пероксидазой хрена, методом ХПЯ 58
2.2.4 Исследование кинетики окисления НАДН в различных средах 59
2.2.5 Спектрофлуориметрическое исследование образования перекиси водорода при окислении НАДН в различных средах 59
2.2.6 Зависимость скорости окисления НАДН, катализируемого пероксидазой хрена, от концентрации субстрата 60
2.2.7 Исследование акта одноэлектронного переноса и образования ферропероксидазы в реакции между НАДН и пероксидазой хрена в бескислородной среде 60
Глава 3. Исследование элементарных стадий каталитического цикла пероксидазы хрена кинетическими методами 62
3.1 Введение 62
3.2 Автоокисление НАДН при различных рН и флуориметрическое определение образующейся перекиси водорода 64
3.3 Зависимость скорости окисления НАДН, катализируемого пероксидазой хрена, от концентрации субстрата и оценка константы Михаэлиса 68
3.4 Исследование стадии одноэлектронного переноса между пероксидазой хрена и НАДН в бескислородной среде 73
3.5 Анализ кинетической кривой окисления НАДН, катализируемого пероксидазой хрена 78
3.6 Заключение 83
Глава 4. Методы спиновой химии как инструмент исследования элементарных стадий каталитического цикла пероксидазы хрена 84
4.1 Введение 84
4.2 Исследование фотоокисления НАДН, катализируемого пероксидазой хрена, методом химической поляризации ядер 85
4.2.1 Эффекты ХПЯ Н, зарегистрированные в процессе фотоокисления НАДН, катализируемого пероксидазой хрена 85
4.2.2 Теоретическое описание наблюдаемого эффекта ХПЯ 90
4.3 Магнитные эффекты в процессе окисления НАДН пероксидазой хрена 95
4.3.1 Ферментативное окисление НАДН, катализируемое пероксидазой хрена 95
4.3.2 Теоретические расчеты наблюдаемого магнитного эффекта в процессе ферментативного окисления НАДН пероксидазой хрена 101
4.4 Магнитные эффекты в процессе ферментативного окисления синтетического аналога НАДН, нифедипина 109
4.5 Заключение 117
Выводы 120
Список литературы 122
