Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 8
1.1. Механизмы образования активных форм кислорода и их токсическое действие на основные компоненты клетки 9
1.1.1. Пути образования и характеристика АФК 9
1.1.2. Повреждающее действие АФК на компоненты клетки 12
1.2. Механизмы адаптивного ответа микроорганизмов на окислительный стресс 16
1.2.1. Общие регуляторные механизмы адаптации микроорганизмов к стрессовым условиям 17
1.2.2. Регулоны защиты микроорганизмов от действия окислительного стресса 23
1.2.3. Механизмы защиты микроорганизмов от действия АФК 28
1.3. Полиамины и их физиологическая роль 37
1.3.1. Пути биосинтеза полиаминов 38
1.3.2. Влияние полиаминов на процессы жизнедеятельности клетки...40
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования 44
2.1. Объекты исследования и условия культивирования 44
2.2. Определение активности Р-галактозидазы 46
2.3. Выделение плазмидной ДНК из клеток Escherichia coli 47
2.4. Трансформация Escherichia coli плазмидной ДНК 48
2.5. Определение степени суперспирализации ДНК 48
2.6. Определение содержания полиаминов в клетках 49
2.7. Определение активности ферментов синтеза полиаминов 50
2.8. Определение содержания свободных радикалов кислорода в клетках Е. coli 51
2.9. Определение активности глюкозо-6 фосфат дегидрогеназы 52
2.10. Определение активности фумаразы 52
2.11. Определение содержания белка 53
2.12. Определение антиоксидантных свойств полиаминов in vitro 53
2.13. Определение частоты мутаций 54
2.14. Подсчет числа живых клеток 54
2.15. Статистическая обработка данных 54
ГЛАВА 3. Полиамины как регуляторы количества свободных радикалов кислорода в клетках Escherichia coli 55
3.1. Влияние супероксидного стресса на активность ключевых ферментов синтеза полиаминов 55
3.2. Антиоксидантные свойства полиаминов in vitro 58
3.3. Антиоксидантные функции полиаминов in vivo 60
ГЛАВА 4. Роль полиаминов в регуляции экспрессии генов soxRS регулона Escherichia coli 63
4.1. Влияние полиаминов на экспрессию гена soxS в условиях супероксидного стресса 64
4.2. Влияние пониженного содержания полиаминов в клетке на уровень экспрессии soxS в условиях супероксидного стресса 68
4.3. Функции полиаминов как положительных транскрипционных модулятров экспрессии генов-мишеней SoxS 70
ГЛАВА 5. Роль полиаминов как топологических модуляторов ДНК в регуляции уровня экспрессии генов soxRS регулона 73
5.1. Влияние путресцина на топологию ДНК в условиях супероксидного стресса 74
5.2. Роль путресцина как топологического модулятора в регуляции генной экспрессии... 77
5.3. Влияние путресцина на частоту мутаций при супероксидном стрессе 80
ГЛАВА 6. Влияние полиаминов на активность адаптивных ферментов в клетках Escherichia coli 82
ГЛАВА 7. Обсуждение результатов 89
7.1. Полиамины как регуляторы количества свободных радикалов кислорода в клетках Escherichia coli 89
7.2 Роль полиаминов в регуляции экспрессии генов soxRS регулона Escherichia coli 92
7.3. Роль полиаминов как топологических модуляторов ДНК в регуляции уровня экспрессии генов soxRS регулона 98
7.4. Влияние полиаминов на активность адаптивных ферментов в клетках Escherichia coli 103
Выводы 110
Литература 111
