Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы. 8
1.1. Формирование активных форм кислорода и их токсическое действие на основные компоненты клетки 9
1.1.1. Формирование АФК. 9
1.1.2. Повреждающее действие АФК на компоненты клетки 11
1.2. Общие регуляторные механизмы адаптации микроорганизмов к стрессовым условиям 15
1.2.1. Двухкомпонентные сигналпроводящие системы 16
1.2.2. «Ощущение кворума» 17
1.2.3. Белки, сочетающие свойства сенсоров и транскрипционных регуляторов 19
1.2.4. Факторы 19
1.2.5. Влияние топологического состояния ДНК на генную экспрессию 21:
1.2.6. Регуляция адаптивного ответа на посттранскрипционном уровне 22
1.3. Особенности адаптивного ответа микроорганизмов на окислительный стресс 23
1.3.1. Регулоны защиты от окислительного стресса 24
1.3.2. Детоксикация АФК 28
1.3.3. Ограничение поступления АФК в клетку 30
1.3.4. Активный выброс из клетки генераторов АФК 31
1.3.5. Биосинтез изоферментов устойчивых к АФК 32
1.3.6. Регуляция уровня ионов металлов 33
1.3.7. Регенерация и репарация повреждений 34
1 А. Полиамины. Физиологическая роль полиаминов 36
1.4.1. Пути биосинтеза полиаминов 37
1.4.2. Физиологическая роль полиаминов 38
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования 46
2.1. Объекты исследования и условия культивирования 46
2.2. Выделение плазмидной ДНК из клеток Escherichia coli 48
2.3. Трансформация Escherichia coli плазмидной ДНК 49
2.4. Определение степени суперспирализации ДНК 50
2.5. Определение содержания полиаминов в клетке и в среде 51
2.6. Определение активности ферментов пол нами нсинтезирующейси стемы 52
2.7. Определение активности Р- галактозидазы 53
2.8. Определение содержания белка 54
2.9. Определение частоты мутаций 54
2.10. Подсчет числа живых клеток 55
2.11. Статистическая обработка данных 55
ГЛАВА 3. Роль полиаминов в регуляции экспрессии генов oxyR регуло на Escherichia colt 56
3.1. Отклик системы синтеза полиаминов на окислительный стресс как индикатор их возможной роли в антиоксидантной защите 56
3.2. Влияние окислительного стресса на экспрессию гена oxyR 58
3.3. Влияние полиаминов на экспрессию генов антиоксидантной защиты 61
3-4. Специфичность эффекта полиаминов на экспрессию генов окислительного стресса 70
ГЛАВА 4. Влияние путресцина на экспрессию адаптивных генов через изменение топологии ДНК 74
4.1. Роль полиаминов в регуляции топологии ДНК в условиях, окислительного стресса 74
4.2. Влияние путресцина на экспрессию гена oxyR через изменение топологического состояния ДНК 78
ГЛАВА 5. Полиамины как ДНК-протекторы в процессе адаптации Escherichia coli к окислительному стрессу 83
5.1. Роль путресцина в защите ДНК от разрывов, индуцированных АФК 83
5.2. Влияние путресцина на частоту мутаций и выживаемость Е, coli при окислительном стрессе 85
ГЛАВА 6. Обсуждение результатов. 88
6.1. Роль полиаминов в регуляции экспрессии генов oxyR регулона Escherichia coli 88
6.2. Влияние путресцина на экспрессию адаптивных генов через изменение топологии ДНК 95
6.3: Полиамины как ДНК-протекторы в процессе адаптации Escherichia coli к окислительному стрессу 99
Заключение 102
Выводы 106
Литература 107
