Введение
Глава I. Обзор литературы 10
1.1. Морфофункциональная характеристика нефрона почки млекопитающих 10
1.2. Транспорт воды через эпителий собирательных трубок почки 12
1.3. Регуляция проницаемости апикальной мембраны клеток собирательных трубок вазопрессином 18
1.4. Кальций-зависимые пути регуляции водной проницаемости плазматической мембраны эпителия собирательных трубок вазопрессином 26
1.5. Модуляторы регуляции водной проницаемости эпителия сбирательных трубок вазопрессином 32
1.6..Регуляция проницаемости базолатеральной мембраны 33
1.7. Становление механизма трансдукции сигнала АДГ в постнатальном онтогенезе 35
1.8.Заключение 39
Глава II. Материалы и методы 41
2.1.Экспериментальные животные 41
2.2. Реактивы 41
2.3.Измерение водной проницаемости эпителия собирательных трубок 42
2.3.1 Растворы 42
2.3.2 Обработка стекол полилизином 42
2.3.3 Получение фрагментов собирательных трубок 42
2.3.4 Измерение водной проницаемости общей поверхности клеток собирательных трубок 43
2.3.5 Измерение водной проницаемости базолатеральной мембраны клеток собирательных трубок 45
2.3.6 Исследование влияния dDAVP на водную проницаемость клеток эпителия собирательных трубок у крыс разного возраста 48
2.3.7. Оценка влияния проникающего аналога цАМФ - дбцАМФ на водную проницаемость клеток эпителия собирательных трубок 48
2.3.8. Исследование влияния внутриклеточного хелатора кальция ВАРТА на эффект dDAVP и дб-цАМФ на водную проницаемость клеток эпителия собирательных трубок 49
2.3.9. Исследование влияния ингибитора протеинкиназы С на эффект dDAVP и дб-цАМФ на водную проницаемость клеток эпителия собирательных трубок 49
2.4. Вестерн-блот анализ 50
2.4.1. Получение срезов почки и их инкубация с различными агентами 50
2.4.2. Полученение мембранной и цитозольной фракции наружного мозгового вещества почки 51
2.4.3. Измерение концентрации белка 51
2.4.5. Электрофоретическое разделение белков, перенос белко на PVDF мембрану 52
2.4.6 Проведение Вестерн-блот анализа 53
2.5. Статистика 53
Глава III. Результаты исследований 55
3.1. Регуляция водной проницаемости клеток открытого конца собирательных трубок почки крысы и экспрессии AQP2, AQP3 десмопрессином в постнатальном онтогенезе 55
3.2. Оценка экспрессии различных изоформ РКС в наружном мозговом веществе почки крыс разного возраста 60
3.3. Влияние внутриклеточного хелатора Са2+ на десмопрессин-зависимое повышение водной проницаемости собирательных трубок почки крысы и содержание РКСа и водных каналов 2 и 3 типа 66
3.4. Подавление ингибитором РКС Ro-31-8220 эффекта десмопрессина на водную проницаемость базолатеральной мембраны клеток собирательных трубок почки крысы 72
3.5. Влияние ингибитора РКС Ro-31-8220 и внутриклеточного хелатора кальция ВАРТА на эффект цАМФ-дбцАМФ на водную проницаемость клеток эпителия собирательной трубки почки крысы 76
Глава IV. Обсуждение 81
Выводы 93
Список цитированной литературы 95
