Введение
2. Обзор литературы. 6
2.1. Модели экспрессии генов. 6
2.2. Структура и функции инсуляторов . 14
2.3. Модели действия инсуляторов. 20
2.4. Белки с ВТВ доменами . 24
2.5. Структура и свойства белков su(Hw) инсулятора. 32
3. Материалы и методы. 41
3.1. Реактивы. 41
3.2. Ферменты. 41
3.3. Праймеры. 41
3.4. Бактериальные и дрожжевые штаммы и плазмидные ДНК. 42
3.5. Культивирование бактерий и дрожжей. 42
3.6. Получение компетентных клеток для трансформации плазмидной ДНК методом электропорации . 43
3.7. Трансформация компетентных клеток плазмидной ДНК (электропорация). 43
3.8. Выделение плазмидной ДНК. 44
3.9. Электрофорез ДНК в агарозном геле. 45
3.10. Расщепление ДНК эндопуклеазами рестрикции. 45
3.11. Лигировапие ДНК. 45
3.12. Тупление выступающих концов ДНК. 45
3.13. Получение мутаций в гене mod(mdg4). 46
3.14. Получение делеции BTcmmod(mdg4). 47
3.15. Получение векторов для двугибридной системы. 47
3.16. Трансформация дрожжевых клеток. 48
3.17. Анализ взаимодействий в двугибридной системе. 48
3.18. Синтез и выделение белков. 49
3.19. Электрофорез белков в денатурирующем 8% ПААГ. 50
3.20. Электрофорез белков в нативном 7% ПААГ. 50
3.21. Перенос и детекция белков на мембране, 51
3.22. Генетические скрещивания. 51
3.23. Детекция белков на политенных хромосомах дрозофилы. 52
3.24. Детекция белков в клетках имагинальных дисков дрозофилы. 52
4. Результаты. 54
4.1. Наличие точечных замен в "заряженном кармане" не влияет на способность белка взаимодействовать с Su(Hw) и димеризоваться. 54
4.2. Белок Mod(mdg4) содержит второй домен, отвечающий за димеризацию . 57
4.3. Функциональная активность мутантных форм белка в работе инсулятора Su(Hw). 60
4.4. Локализация белков на политенных хромосомах и в ядерных тельцах диплоидных клеток. 70
5. Обсуждение результатов. 71
6. Выводы. 75
7. Список использованной литературы.
