Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 15
1.1 Структурные белки цитоскелета и межклеточных контактов: структура, функции и участие в механической рецепции 15
1.1.1 Актиновый цитоскелет эндотелиальных клеток 17
1.1.2 Микротрубочки эндотелиальных клеток 24
1.1.3 Кадгерин эндотелия сосудов 29
1.1.4 Механическое воздействие: возможные рецепторы и преобразователи сигнала.32
1.2 Механизмы воздействия фактора некроза опухоли альфа на проницаемость
эндотелиальных клеток 36
1.2.1 Воздействие фактора некроза опухоли альфа на микротрубочки 38
эндотелиальных клеток 38
1.2.2 Воздействие фактора некроза опухоли альфа на VE-кадгерин 41
эндотелиальных клеток 41
1.3 Микрогравитация как механическая стимуляция эндотелиальных клеток 42
1.4. Молекулы адгезии эндотелиальных клеток: участие в реакции воспаления и
механизмах гравитационной чувствительности 49
1.4.1 Роль молекул адгезии в рекрутировании лейкоцитов, строение, экспрессия и сайты связывания VCAM-1 49
1.4.2 Строение ICAM-1, экспрессия и кластеризация 54
1.4.3 Строение Е-селектина, экспрессия и кластеризация 1.5 Влияние микрогравитации на экспрессию молекул адгезии 59
1.6 Влияние микрогравитации на секрецию интерлейкинов 62
эндотелиальными клетками 62
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 68
2.1 Используемое оборудование, материалы и реактивы 68
2.1.1 Оборудование 68
2.1.2 Химические реагенты 69
2.1.3 Моноклональные антитела 70
2.2 Приготовление сред для культивирования эндотелиальных клеток 70
2.2.1 Приготовление полной среды 70
2.2.2 Приготовление среды для культивирования эндотелиальных клеток 70
2.2.3 Приготовление среды для криоконсервации клеток 70
2.3 Выделение и культивирование сосудистых эндотелиальных клеток
2.3.1 Получение первичной культуры эндотелиальных клеток пупочной вены человека 70
2.3.2 Пассирование первичной культуры эндотелиальных клеток 71
2.3.3 Криоконсервация культивируемых эндотелиальных клеток 72
2.4 Методы исследования 72
2.4.1 Структура исследования эффектов моделируемой микрогравитации. Параметры экспериментальной установки 72
2.4.2 Принцип метода проточной цитофлуориметрии для анализа антигенов и морфологических характеристик клеток 74
2.4.3 Оценка жизнеспособности культивируемых ЭК пупочной вены человека 75
2.4.4 Оценка иммунофенотипа культивируемых ЭК пупочной вены человека 75
2.4.5 Иммуноцитохимическое окрашивание клеток 76
2.4.6 Определение содержания цитокинов в среде культивирования 77
2.4.7 Анализ уровня экспрессии генов 79
2.5 Статистическая обработка результатов 80
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение 81
3.1. Влияние моделирования эффектов микрогравитации на морфологию и цитоскелет эндотелиальных клеток человека in vitro 81
3.1.1. Влияние моделирования эффектов микрогравитации на актиновый цитоскелет
3.1.2. Влияние моделирования эффектов микрогравитации 92
на систему микротрубочек 92
3.2. Жизнеспособность культивируемых эндотелиальных клеток в условиях моделируемой микрогравитации 98
3.3 Влияние моделируемой микрогравитации на экспрессию молекул клеточной адгезии эндотелиальных клеток 100
3.3.1. Профиль поверхностных маркеров эндотелиальных клеток 100
3.3.2. Влияние моделирования эффектов микрогравитации на экспрессию молекул клеточной адгезии 103
3.3.2. Влияние моделирования эффектов микрогравитации на экспрессию 115
VE-кадгерина адгезионных контактов эндотелиальных клеток 115
3.4. Влияние моделирования эффектов микрогравитации на секрецию цитокинов эндотелиальными клетками 122
Заключение 130
Выводы 132
Список литературы
