Введение
1. Электрон-транспортная цепь
1.1 Окислительное фосфорилирование 8
1.2 Роль митохондрий и их структура 10
2. Структура NADH-CoQ-редуктазы
2.1 Место Комплекса І в дыхательной цепи, перенос электронов и протонов. 12
2.2 Состав и структура прокариотических и эукариотических дегидрогеназ 16
2.3 Характеристика FeS кластеров Комплекса I 24
2.4 Филогения Комплекса I 28
2.5 Биогенез Комплекса I 30
3. Каталитическая активность NADH — дегидрогеназы
3.1 Каталитические свойства NADH-CoQ-редуктазы, 32
3.2 Ингибиторы NADH-CoQ-редуктазы 40
3.3 Механизмы переноса электронов и протонов 43
3.4 Роль железо-серных кластеров и FMN в механизме катализа Комплекса I 46
4. Нарушения Комплекса I и связанные с ними болезни 47
4.1. Энцефаломиопатии 48
4.2. Заболевания, связанные с изменениями в митохондриальном геноме (генетические изменения) 49
4.3 Митохондрии и гипоксия 54
2 Материалы и методы
1. Выделение митохондрий из сердца быка .57
2. Получение митохондриальных частиц 58
3. Измерение ферментативной активности59
4. Фотохимические опыты,., 60
5. Флуориметрический анализ .62
6. Эксклюзионная хроматография 62
7. Полярография .62
8. Электрофоретические методы 63
9. Определение концентрации белков 63
3 Результаты и их обсуждение
1. Сравнительное изучение NADH-дегидрогеназной и NADH активности митохондрий. ...64
1.1. Окисление NADH в суспензии митохондрий 65
1.2. Действие ионного детергента на препараты митохондрий 72
1.3. Получение оптически прозрачных митохондриальных фракций 75
2. Роль флавина, убихинона и железо-серных кластеров в переносе
электронов на искусственные и природные акцепторы 80
2.1. Роль флавина в передаче электронов в Комплексе 1 81
2.1.1. Деструкция флавинов при облучении синим светом 81
2.1.2. Влияние деструкции флавина на скорость окисления NADH митохондриями 84
2.1.3. Динамика спонтанного изменения флавиновой флуоресценции митохондриальной суспензии 87
2.2. оль железо-серных кластеров в переносе электронов . 89
2.3. Лаг-период в митохондриальных редокс реакциях NADH-ДХФИФ .91
2.4. Роль коэнзима Q в шунтировании реакций окисления NADH в митохондриях 98
2.5. Влияние цитохрома с на NADH-оксидазную реакцию 99
4 Заключение 102
5 Выводы 106
6 Список литературы 107
