Введение
1. Обзор литературы 14
1.1. Протеомные и геномные факторы в морфологических изменениях опухолевых клеток 14
1.1.1. Нарушение эпигенетического контроля и опухолевый рост 14
1.1.2. Морфологические изменения нейральных клеток при воздействии факторов дифференцировки 25
1.2. Значение сиалидаз и ганглиозидов в морфологических изменениях опухолевых клеток 40
1.2.1. Сиалидазная активность в структурных изменениях клеточного ядра 40
1.2.2. Значение ганглиозидов для морфологических изменений клеток 45
1.2.3. Значение сиалидаз и ганглиозидов в
морфофункциональной пластичности нейральных клеток 56
1.3. Ферменты, участвующие в метаболизме ганглиозидов 61
1.3.1. Методические особенности исследования активности ферментов, регулирующих состав ганглиозидов 61
1.3.2. Метаболизм ганглиозидов 69
1.3.3. Субстратная специфичность разных типов сиалидаз 75
1.3.4. Липидные микродомены и сиалидаза ассоциированная с плазматической мембраной 76
1.4. Циклический аденозинмонофосфат как фактор
дифференцировки нейральных клеток 81
2. Материалы и методы 87
2.1. Перевиваемые клеточные линии in vivo 87
2.2. Поддержание клонов перевиваемой in vivo рабдомиосаркомы РА-23 крыс 87
2.3. Клеточные культуры и генетическая трансфекция 89
2.4. Анализ активности сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной 91
2.5. Анализ активности лизосомальной сиалидазы 92
2.6. Анализ активности ацетилхолинэстеразы 93
2.7. Электрофорез белков в полиакриламидном геле (ПААГ-электрофорез) 94
2.8. Количественная полимеразная цепная реакция 97
2.9. Иммуноцитохимический анализ 99
2.10.Импрегнация клеток нитратом серебра 99
3. Результаты 100
3.1. Морфофункциональные изменения клеток опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА-23 крыс при воздействии противоопухолевых факторов 100
3.1.1. Метастатический потенциал клеток опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА—23 крыс при воздействии противоопухолевых факторов 100
3.1.2. Сиалидазная активность в клетках опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА-23 крыс, контрастных
по метастатическому потенциалу 107
3.2. Функциональные изменения клеток опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА-23, связанные с отбором на повышение и понижение частоты опухолевых клеток с нарушением структуры ядер 111
3.2.1. Отбор опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА-23 крыс на повышение и понижение частоты опухолевых клеток с нарушением структуры ядер 111
3.2.2. Метастатический потенциал опухолевых клонов, контрастных по частоте клеток с нарушениями структуры ядер 123
3.2.3.Активность лизосомальной сиалидазы в клетках опухолевых клонов, различающихся по нарушениям структуры ядер 134
3.2.4. Активность сиалидазы ассоциированной с
плазматической мембраной в клетках опухолевых клонов, различающихся по нарушениям структуры ядер 136
3.3. Морфофункциональные изменения нейральных клеток линии NB-1 нейробластомы человека 138
3.3.1. Морфологические маркеры дифференцировки клеток линии NB-1 нейробластомы человека при повышенной экспрессии сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной 138
3.3.2. Анализ активности сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной в клеточной линии NB-1 нейробластомы человека 149
3.3.3. Активность ацетилхолинэстеразы в клеточной линии NB-1 нейробластомы человека при
воздействии факторов дифференцировки 150
3.3.4. Активность лизосомальной сиалидазы в клеточной линии NB-1 нейробластомы человека 153
3.4. Анализ молекулярно-генетических маркеров экспрессии сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной в клеточной линии NB-1 нейробластомы человека 155
3.4.1. Верификация продукта транскрипции гена сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной в клетках NB—1 155
3.4.2. Иммуноцитохимическая верификация клеток NB-1,
положительных по экспрессии сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной 157
3.4.3. Верификация методом протеомного анализа антигена, соответствующего сиалидазе ассоциированной с плазматической мембраной 159
Обсуждение 161
Выводы 186
Практические предложения 187
Список литературы
