ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .................................................................................................................. 5
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ................................................................................ 19
1.1. Ожирение и дисфункция жировой ткани ....................................................... 19
1.1.1. Этиология ожирения.................................................................................. 19
1.1.2. Генетика ожирения .................................................................................... 21
1.1.3. Жировая ткань и её типы ........................................................................... 23
1.1.4. Развитие хронического воспаления при ожирении ................................. 25
1.1.5. Секретом жировой ткани........................................................................... 27
1.2. Развитие сопутствующих заболеваний при ожирении .................................. 37
1.2.1. Инсулинорезистентность и сахарный диабет 2 типа ............................... 37
1.2.2. ЭВ в патогенезе инсулинорезистентности и сахарного диабета 2 типа . 41
1.2.3. Атеросклероз .............................................................................................. 45
1.2.4. ЭВ в патогенезе атеросклероза ................................................................. 49
1.3. Обратный транспорт холестерина .................................................................. 51
1.3.1. Роль транспортеров ABCA1 и ABCG1 в обратном транспорте
холестерина .......................................................................................................... 52
1.3.2. Роль LXRs и PPARɣ в регуляции экспрессии транспортеров холестерина
.............................................................................................................................. 54
1.3.3. Обратный транспорт холестерина в жировой ткани ............................... 55
1.3.4. Обратный транспорт холестерина в макрофагах ..................................... 56
1.3.5. Экспрессия генов ABCA1, ABCG1, LXRβ (NR1H2), LXRα (NR1H3) и
PPARG в жировой ткани ..................................................................................... 57
1.3.6. Экспрессия генов ABCA1, ABCG1, LXRβ (NR1H2), LXRα (NR1H3) и
PPARG в макрофагах ........................................................................................... 59
3
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ........................................................................ 61
2.1. Характеристика исследуемых групп ............................................................... 61
2.2. Инкубирование жировой ткани ....................................................................... 63
2.3. Выделение экстраклеточных везикул ............................................................. 64
2.3.1. Выделение эстраклеточных везикул методом последовательного
центрифугирования ............................................................................................. 64
2.3.2. Выделение эстраклеточных везикул методом химической преципитации
из культуральной среды и сыворотки крови ...................................................... 64
2.4. Характеристика выделяемой фракции экстраклеточных везикул ................ 65
2.4.1. Анализ траектории наночастиц................................................................. 65
2.4.2. Вестерн-блот .............................................................................................. 65
2.4.3. Оценка концентрации холестерина в образцах экстраклеточных везикул
жировой ткани ..................................................................................................... 66
2.4.4. Криоэлектронная микроскопия препаратов экстраклеточных везикул .. 66
2.4.5. Динамическое светорассеяние препаратов экстраклеточных везикул ... 67
2.5. Культивирование макрофагов человека ......................................................... 67
2.6. Вестерн-блот анализ препаратов макрофагов ................................................ 68
2.7. Окрашивание дифференцированных макрофагов человека красителем Oil
Red O ....................................................................................................................... 68
2.8. Оценка относительного уровня мРНК генов обратного транспорта
холестерина методом ПЦР в реальном времени ................................................... 69
2.9. Выделение РНК экстраклеточных везикул .................................................... 70
2.10. Профилирование микроРНК экстраклеточных везикул жировой ткани
методом NanoString ................................................................................................ 71
2.11. Анализ таргетома микроРНК экстраклеточных везикул жировой ткани ... 72
4
2.12. Оценка относительного уровня микроРНК экстраклеточных везикул
сыворотки крови методом ПЦР в реальном времени ........................................... 73
2.13. Статистическая обработка данных ............................................................... 75
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ............................................................ 76
3.1. Характеристика экстраклеточных везикул жировой ткани ........................... 76
3.1.1. Характеристика экстраклеточных везикул по размеру и концентрации 76
3.1.2. Морфологическое описание экстраклеточных везикул жировой ткани с
помощью криоэлектронной микроскопии ......................................................... 79
3.1.3. Содержание экзосомальных маркеров и специфических белков жировой
ткани ..................................................................................................................... 82
3.1.4. Содержание холестерина в экстраклеточных везикулах жировой ткани
.............................................................................................................................. 84
3.2. Исследование состава микроРНК экстраклеточных везикул жировой ткани
.................................................................................................................................. 86
3.3. Оценка содержания микроРНК в экстраклеточных везикулах сыворотки
крови ........................................................................................................................ 89
3.4. Оценка влияния экстраклеточных везикул жировой ткани на экспрессию
генов обратного транспорта холестерина в макрофагах человека ...................... 93
3.5. Экспрессия генов ABCA1, ABCG1, PPARG, LXRβ (NR1H2), LXRα (NR1H3) в
подкожной и висцеральной жировой ткани у пациентов с ожирением .............. 95
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ................................................................ 99
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ........................................................................................................ 108
ВЫВОДЫ ................................................................................................................. 110
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ............................. 111
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ........................................................................................ 115
