Введение
Глава 1. Основные компоненты клеточной стенки растений и их свойства
1.1. Целлюлоза 9
1.2. Гемицеллюлозы и пектины 11
1.3. Лигнин 13
ГЛАВА 2. Целлюлозосоджержащие материалы (ЦСМ) 15
2.1. Общая характеристика состава ЦСМ 15
2.2. ЦСМ как перспективный источник сырья и энергии I7
2.3. Предобработка целлюлозы и целлюлозосодержащих материалов 19
ГЛАВА 3. Биокаталитическая деградация ЦСМ 21
3.1. Современная классификация целлюлаз 21
3.2. Основные ферменты целлюлолитического комплекса 22
3.3. Механизм биокаталитической деградации целлюлозы 25
3.4. Факторы, влияющие на эффективность ферментативного гидролиза целлюлозы 28
ГЛАВА 4. Современные подходы к получению н0вых штаммов продуцентов целлюлаз 31
4.1. Общая характеристика подходов к оптимизации состава ферментных комплексов... 31
4.2. Система экспрессии в грибах рода Pnicillium 34
П. Эксперементалбная часть 39
ГЛАВА 5. Объекты исследования и методы экспериментов 39
5.1. Ферментные препараты 39
5.2. Субстраты 39
5.3. Прочие реактивы 39
5.4. Хроматографические сорбенты 40
5.5. Получение нротопластов и проведение транеформации штамма-реципиента гриба Р. verruculosum 4Q
5.6. Культивирование трансформантов 42
5.7. Метод определения компонентного состава ферментных препаратов 42
5.8. Определение концентрации белка 43
5.9. Определение биохимических характеристик ферментов
5.10. Методы определения активности ферментов 43
5.11. Масс-спектрометрический анализ трипсиновых гидролизатов белков 45
5.12. Определение температурного и рН-оптимума действия ферментных препаратов 46
5.13. Изучение термостабильности ферментных препаратов 46
5.14. Гидролиз ЦСМ 46
III. Результаты и их обсуждение 48
ГЛАВА 6. Получение ферментных препаратов, полученных с помощью новых рекомбинантных штаммов P. verruculosum 48
6.1. Трансформация штамма -реципиента P. verruculosum 537 49
6.2. Результаты первичного скрининга трансформантов «тандем» 50
6.3. Результаты первичного скрининга трансформантов «дуплет» 52
6.4. Результаты первичного скрининга трансформантов «триплет» 55
6.5. Получение сухих ферментных препаратов 58
ГЛАВА 7. Физико-химические свойства новых ферментных препаратов, полученных с помощью рекомбинантных штаммов P.verruculosum 59
7.1. Анализ ферментных препаратов методом ДДС-электрофореза в денатурирующих условиях 59
7.2. Анализ активностей ферментных препаратов по отношению к различным субстратам 59
7.3. рН- и температурные оптимумы активности и стабильности ферментных препаратов 63
ГЛАВА 8. Определение компонентного состава новых рекомбинантных ферментных препаратов 69
ГЛАВА 9. Верификация уровня экспресии ферментов новых рекомбинантных штаммов p.verruculosum осахаривающей способностью различных видов ЦСМ 75
9.1. Результаты гидролиза измельченной микрокристаллической целлюлозы 76
9.2. Результаты гидролиза измельченной обессмоленной сосновой древесины 78
9.3. Результаты гидролиза измельченной осиновой древесины 82
9.4. Результаты гидролиза измельченной багассы 85
Выводы 89
Список литературы 90
