Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 17
1.1 Факторы вирулентности Bacillus anthracis 17
1.2 Особенности иммунного ответа к Bacillus anthracis 19
1.3 Клеточный иммунный ответ к сибиреязвенным бациллам 20
1.4 Подходы к созданию вакцин от сибирской язвы 22
1.5 Используемые в настоящее время противосибиреязвенные вакцины... 24
1.6 Рекомбинантный аденовирус человека пятого серотипа и его применение для генетической иммунизации 27
ГЛАВА 2. Собственные исследования 31
2.1 Материалы 31
2.1.1 Вирусыи бактериальные штаммы 31
2.1.2 Клеточные линии 31
2.1.3 Плазмидные векторы 31
2.1.4 Ферментыи другие реактивы 31
2.1.5 Лабораторные животные 33
2.1.6 Лабораторное оборудование 33
2.2 Методы исследования 34
2.2.1 Бактериологические методы 34
2.2.2 Генно-инженерные методы 36
2.2.3 Вирусологические методы 40
2.2.4 Молекулярно-биологические методы 42
2.2.5 Серологические методы 42
2.2.6 Методы работы с животными 45
2.2.7 Статистическая обработка результатов исследований 45
2.2.8 Биоинформатические методы 46
2.3 Результаты исследований 47
2.3.1 Дизайн генетических конструкций сРА, sPA, PA-Fc 47
2.3.2 Получение челночных плазмид pSh-cPA, pSh -sPA, pSh -PA-Fc 50
2.3.3 Получение рекомбинантных аденовирусов Ad-cPA, Ad-sPA, Ad-PA-Fc 52
2.3.4 Изучение экспрессии генов сРА, sPA, PA-Fc из состава рекомбинантных аденовирусов методом вестерн-блотта 55
2.3.5 Определение антиген-специфического лимфопролиферативного ответа к протективному антигену у мышей, иммунизированных рекомбинантными аденовирусами Ad-PA-Fc, Ad-sPA и Ad-cPA 56
2.3.6 Оценка индукции антител класса IgG к РА в сыворотках крови мышей, иммунизированных рекомбинантными аденовирусами, методом ИФА 57
2.3.7 Оценка методом ИФА подклассов антител IgG специфических к РА в сыворотках крови мышей 59
2.3.8 Изучение протективных свойств рекомбинантных аденовирусов Ad-cPA, Ad-sPA, Ad-PA-Fc против В. anthracis методом контрольного заражения лабораторных животных 61
2.3.9 Изучение длительности защитных свойств у лабораторных животных, интраназально иммунизированных рекомбинантными аденовирусами Ad-cPA, Ad-sPA, Ad-PA-Fc 62
2.3.10 Оценка методом ИФА индукции антител класса IgG к РА в сыворотках крови морских свинок, иммунизированных рекомбинантными аденовирусами 63
2.3.11 Оценка защитных свойств гипериммунного протективного антигена на модели летальной сибиреязвенной инфекции на морских свинках 64
2.3.12 Оценка напряженности иммунного ответа при иммунизации гипериммунным протективным антигеном 65
ГЛАВА 3. Обсуждение результатов 67
Выводы 79
Список литературы 80
