Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Сравнительный хромосомный пэинтинг млекопитающих 11
1.1.1. Сравнительное картирование млекопитающих 11
1.1.2. Хромосомный сортинг 14
1.1.3. Построение предкового кариотипа млекопитающих 16
1.1.4. Неравномерность кариотипическои эволюции млекопитающих 18
1.2. Современные методы анализа состава хромосом 22
1.2.1. Микродиссекция 22
1.2.2. Многоцветная FISH. 24
1.2.3. Многоцвтный хромосомный бар-код и RxFISH 26
1.2.4. Многоцветный бэндинг 27
1.3. В-хромосомы 29
1.3.1. Происхождение В-хромосом 29
1.3.2. Молекулярная эволюция В-хромосом 32
1.3.3. Молекулярный состав В-хромосом 33
1.3.4. Механизмы передачи и накопления В-хромосом 34
1.3.5. Модели, описывающие динамику В-хромосом в популяциях 36
1.3.6. Воздействие В-хромосом на носителя 37
1.3.7. В-хромосомы млекопитающих 39
1.3.7.1. В-хромосомы хищных 42
1.3.7.2. В-хромосомы грызунов 44
ГЛАВА 2. Материалы и методы 47
2.1. Материалы 47
2.2. Методы 50
2.2.1. Приготовление препаратов хромосом 50
2.2.2. Получение пэйнтинг-проб с помощью отбора на микрочастицах 51
2.2.2.1. Выделение высокомолекулярной ДНК 51
2.2.2.2. Получение тотальной ПЦР-библиотеки генома 51
2.2.2.3. Интер-А1и-ПЦР 52
2.2.2.4. Гетерологическая гибридизация в растворе 52
2.2.2.5. Экстракция гибридных молекул ДНК 52
2.2.3. Получение Cotl ДНК. 53
2.2.3.1. Выделение ДНК из ядер 53
2.2.3.2. Реассоциация ДНК 53
2.2.3.3. Гидролиз однонитчатой ДНК S-нуклеазой 53
2.2.4. Микродиссекция и DOP-ПЦР 54
2.2.4.1. Приготовление растворов 54
2.2.4.2. Подготовительные процедуры 54
2.2.4.3. Микродиссекция 55
2.2.4.4. DOP-ПЦР -1 (секвеназный вариант) 56
2.2.4.5. DOP-ПЦР -2 (Taq - полимеразный вариант) 57
2.2.5. Флюоресцентная in situ гибридизация 58
2.2.5.1. Мечение зонда 58
2.2.5.2. Предгибридизация и гибридизация 58
2.2.5.3. Отмывки и детекция 59
2.2.5.4. Многоцветная FISH 59
2.2.5.5. Реципрокный пэйнтинг собака /человек / лисица 60
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 61
3.1. Получение и использование пэйнтинг проб на базе источников днк, альтернативных
СОРТИНГУ 61
3.1.1. Разработка метода получения пэйнтинг проб путем экстракции хромосомспецифичных библиотек с помощью парамагнитных частиц 62
3.1.1.1.Получение зонда 62
3.1.1.2. Получение тотальной ПЦР-библиотеки генома 64
3.1.1.3. Гетерологичная гибридизация in vitro и экстракция гибридных молекул 64
3.1.2. Картирование районов, гомологичных хромосоме 3 человека у хищных, парнокопытных зайцеобразных 66
3.1.2.1. Район, гомологичный хромосоме 3 человека, у хищных 66
3.1.2.2. Район, гомологичный хромосоме 3 человека, у парнокопытных 69
3.1.2.3. Район, гомологичный хромосоме 3 человека, у зайцеобразных 72
3.2. Реципрокный пэйнтинг хромосом собаки, человека и лисицы с использованием сортинговых библиотек 75
3.3. Получение раионспецифичных библиотек для многоцветного бэндинга всех хромосом кариотипа человека 78
3.3.1. Создание раионспецифичных библиотек 78
3.3.2. Многоцветный бэндинг 80
3.3.3. Применение метода в клинической диагностике 81
3.4. Исследование в-хромосом енотовидной собаки и восточно-азиатской мыши с помощью микродиссекции и двухцветной FISH 88
3.4.1. В-хромосомы енотовидной собаки 88
3.4.2. В-хромосомы восточно-азиатской мыши 92
ГЛАВА 4. Заключение 102
Выводы 105
список литературы
