Введение
1. Обзор литературы 11
1.1 Боковой амиотрофический склероз, общая информация 11
1.2 Клинические признаки и диагностика БАС 12
1.3 Генетика бокового амиотрофического склероза 14
1.3.1 БАС-ассоциированные мутации 15
1.3.2 Дополнительные генетические факторы бокового амиотрофического склероза 20
1.3.3 Генетические риски развития бокового амиотрофического склероза 22
1.4. Патологические включения при боковом амиотрофическом склерозе 23
1.5 Патогенетические механизмы БАС 27
1.5.1 Гибель мотонейронов 28
1.5.1 Белок SOD1 29
1.5.2 Белок TDP-43 31
1.5.3 Локус C9ORF72 34
1.5.4 Белок FUS 37
2. Материалы и методы исследования 48
2.1 Работа с животными 48
2.1.1 Линии лабораторных мышей 48
2.1.2 Манипуляции с ранними эмбрионами и хирургические процедуры на мышах 48
2.1.3 Инструментальные методы анализа двигательной функции мышей 50
2.2 Молекулярно-биологические методы 51
2.2.1 Трансгенноая кассета 51
2.2.3 Введение трансгена в геном мыши 51
2.2.4 Детекция трансгенной кассеты в геноме мыши 52
2.3 Биохимические методы 53
2.3.1 Анализ ДНК в агарозном геле 53
2.3.2 Экстракция белков 53
2.3.3 Денатурирующий гель-электрофорез по Леммли 54
2.3.4 Иммуноблоттинг 54
2.4 Гистологический анализ 55
2.4.1 Подготовка тканей и приготовление срезов. 55
2.4.2 Окраска по методу Ниссля 56
2.4.3 Иммуногистохимическое окрашивание 57
2.4.4 Стереологический подсчет нейронов 58
2.5 Статистичекая обработка данных 60
3 Результаты исследования и обсуждение 61
3.1 Получение линии трансгенных мышей Thy-1/FUS 1-359 и их общая фенотипическая характеристика 61
3.1.1 Трансгенная кассета и модификация генома мыши. 63
3.1.2 Биохимический анализ результатов трансгенеза в линии мышей Thy-1/FUS 1-359 65
3.1.3 Генетический фон линии мышей Thy-1/FUS 1-359 68
3.1.4 Фенотипический анализ мышей линии Thy-1/FUS 1-359 70
3.2 Патогистологическая характеристика FUSопатии в спинном мозге мышей линии Thy-1/FUS 1-359 76
3.3 Исследование динамики дегенерации и гибели двигательных нейронов спинного мозга у THY-1/FUS 1-359 мышей. 82
3.4 Анализ миелинированных фибрилл в передних и задних
корешках спинного мозга Thy-1/FUS 1-359 мышей 91
3.5 Анализ уровня нейротрофического фактора BDNF 97
3.6 Манифестация клинических признаков прогрессии
нейродегенеративного процесса у мышей линии THY-1/FUS 1-359.
100
3.7 Анализ некоторых показателей регенеративного процесса в спинном мозге мышей линии Thy-1/FUS 1-359 106
Выводы 110
Практические рекомендации 111
Список работ, опубликованных по теме диссертации 112
Список использованной литературы 116
