Введение
2. Болезни картофеля и достижения генной инженеррїи в борьбе с ними
2.1. Фитофтороз 10
2.2. Альтернариоз 12
2.3. Ризоктониоз 14
2.4. Рак картофеля 15
2.5. Сухая фузариозная гниль 16
2.6. Обыкновенная парша 17
3. Роль антимикробных белков дефензинов в защите растений от фитопатогенов 19
3.1. Общее строение дефензинов 19
3.2. Экспрессия дефензинов в органах растений 22
3.3. Антимикробная активность дефензинов «. 23
3.4. Получение трансгенных растений с генами дефензинов и их устойчивость к болезням 25
4. Перенос генов в растительный геном с помощью агробактериальной трансформации . 28
5. Материалы и методы 31
5.1. Объекты исследований 31
5.1.1. Растительный материал 31
5.1.2. Векторная конструкция и агробактериальные штаммы 32
5.1.3. Штаммы фитопатогенов
5.2. Место проведения и схема полевого и вегетационного опытов 34
5.3. Метеорологические условия 2002-2003 гг 35
5.4. Микроклональное размножение картофеля в условиях in vitro 36
5.5. Методика выделения ДНК из растительных тканей картофеля и ПЦР-анализа з
5.6. Методы оценки трансгенных растений на устойчивость к болезням 39
5.7. Биохимическая идентификация исходных и трансгенных растений с помощью белковых маркеров 40
5.8. Статистическая обработка данных 41
6. Результаты и обсуждение 42
6.1. Оптимизация методики трансформации картофеля. 42
6.1.1. Анализ чувствительности трансформантов к канамицину 42
6.1.2. Получение трансформированных растений картофеля с помощью штаммов LBA4404 и LGV3850 Agrobacterium tumefaciens.. 43
6.1.3. Получение трансформированных растений картофеля с помощью штамма А4 Agrobacterium rhizogenes 6.2. Оценка трансгенности трансформированных растений картофеля... 54
6.3. Характеристика устойчивости трансгенных линий картофеля к грибным инфекциям
6.3.1. Характеристика устойчивости трансгенных линий картофеля к фитофторозу 58
6.3.2. Характеристика устойчивости трансгенных линий картофеля к альтернариозу 68
6.3.3. Характеристика устойчивости трансгенных линий картофеля к ризоктониозу in vitro 76
6.3.4. Лабораторная оценка устойчивости к раку картофеля
6.3.5. Лабораторная оценка устойчивости к сухой фузариозной гнили 82
6.3.6. Визуальная оценка устойчивости к парше обыкновенной
6.4. Определение урожайности трансгенных растений картофеля 85
6.5. Морфологические и физиологические особенности трансгенных линий картофеля 91
6.6. Комплексная оценка трансгенных линий картофеля 94
6.7. Доказательство соответствия трансгенного и исходного генотипов с помощью белковых маркеров 109
7. Экономическая эффективность выращивания трансгенного картофеля, устойчивого к грибным болезням 111
Выводы 113
Список литературы 1
