Введение
ГЛАВА 1. Введение 6
ГЛАВА 2. Обзор литературы. Изучение роли цитокининов в морфогенетических процессах у растений 9
2.1. Цитокинины: структура, функции и локализация в растении 9
2.2. Основные этапы метаболизма цитокининов: биосинтез и деградация и
2.2.1. Аденилатные и т-рнк изопентенилтрансферазы - основные типы ферментов биосинтеза цитокининов у
Растений 14
2.2.2. Методы изучения функциональной активности изопентенилтрансфераз/лгкяяо 16
2.2.3. Цитокининоксидазы - ферменты деградации цитокининов, их вклад в регуляцию метаболизма цитокининов в растении 19
2.3. Методы изучения роли цитокининов в жизни растения 21
2.3.1. Генетический подход: выявление «цитокининовых» мутантов у высших растений 21
2.3.2. Использование методов генной инженерии для изучения роли цитокининов в морфогенезе растений 25
2.4. Многообразие типов неопластического роста у растений 34
2.4.1. корончатые галлы - опухоли растений, индуцируемые Agrobacterium tumefaciens 35
2.4.2. Генетические опухоли растений 36
2.4.3. Межвидовые гибриды как модель для изучения опухолеобразования. наследование генетических опухолей у межвидовых гибридов рода Nicotiana 37
2. 5. Генетическая коллекция инбредных линий редиса - модель для изучения роли гормонов в опухолебразовании 39
ГЛАВА 3. Материалы и методы исследования 52
3.1. Материалы 52
3.1.1. Растительный материал 52
3.1.2. Бактериальные штаммы 52
3.2. Методы 53
3.2.1. Метод агробактериальной трансформации in VIVO 53
3.2.2. Изучение реакции на экзогенные фитогормоны IN VITRO 53
3.2.3. Молекулярно-генетические методы исследования 55
3.2.4. Количественное определение цитокининов и иук в растительных экстрактах 59
3.2.5. статистическая обработка данных 64
ГЛАВА 4. Результаты 65
4.1. Получение коллекции трансгенных растений со вставкой гена биосинтеза цитокинина изопентенилтрансферазы {IPT) инеомицинфосфотрансферазы (NPTII) методом агробактериальной трансформации безопухолевой линии №30 IN VIVO 65
4.1.1. Получение растений редиса, трансгенных по генам биосинтеза цитокинина изопентенилтрансферазы ipt и неомицинфосфотрансферазы . 65
4.1.2. Получение растений редиса, трансгенных по гену неомицинфосфотрансферазы nptIL 75
4.2. Изучение экспрессии гена ipt у опухолеобразующих и
безопухолевых трансформантов 77
4.3. Изучение чувствительности к фитогормонам in vitro трансгенных растений, содержащих вставку гена IPT. 82
4. 3. 1. Исследование чувствительности трансгенных растений редиса линии №30 к цитокинину in vitro 82
4.3.2. Изучение реакии на цитокинин БАП (6-бензиламинопурин) трансгенных по гену ipt растений редиса , 88
4.3. 3. Оценка чувствительности эксплантов к ауксинам in vitro...,. 91
4.3.3.1. Изучение реакции на ауксин 2,4 Д(10 мг/л) 92
4.3.3.2. Анализ реакции на ауксины: ИУК в концентрации 2 мг/л и ИУКъ концентрации 1мг/л 94
4.4.Количественное определение цитокининов и иук в тканях опухолевых и безопухолевых трансгенных растений по гену IPT. 101
4.4.1. Количественное определение эндогенного уровня ИУК у некоторых трансгенных по гену ipt растений 101
4.4.2. Количественное определение эндогенного уровня основных групп ЦИТОКИНИНОВ у
некоторых семей трансгеиных по гену ipt растений 102
ГЛАВА 5. Обсуждение 107
Выводы 130
Список литературы 131
