Введение
2. Обзор литературы 12
2.1. Характеристика вируса КЧС 12
2.1.1. Классификация, морфология и физико-химические свойства вируса КЧС 12
2.1.2. Организация генома вируса КЧС и антигенные свойства кодируемых структурных белков 12
2.1.3. Биологические свойства вируса КЧС 17
2.2. Характеристика возбудителя ГЭ КРС 21
2.2.1. Структура прионного белка 21
2.2.2. Свойства прионного белка 22
2.2.3. Диагностика прионных болезней 24
2.3. Получение пептидов и использование созданных на их основе синтетических антигенов в диагностике инфекционных заболеваний животных и человека 25
2.3.1. Методы теоретического поиска иммунодоминантных участков белков 25
2.3.2. Краткое описание методов синтеза пептидов 30
2.3.3. Получение искусственных антигенов на основе синтетических пептидов для диагностики инфекционных заболеваний животных и человека 32
2.4. Заключение по литературному обзору 51
3. Собственные исследования 52
3.1. Материалы и методы 52
3.1.1. Материалы, оборудование и реагенты 52
3.1.2. Методы исследования 53
3.2. Результаты собственных исследований 64
3.2.1. Компьютерный анализ аминокислотной последова тельности белка Е2 вируса КЧС штамма ЛК ВНИИВВиМ 64
3.2.2. Компьютерный анализ аминокислотной последовательности прионного белка КРС 67
3.2.3. Твердофазный синтез пептидов - фрагментов белка Е2 вируса КЧС и прионного белка КРС 68
3.2.3.1. Синтез пептидов Boc/Bzl методом 69
3.2.3.2. Синтез пептидов Fmoc/But методом 73
3.2.4. Результаты аминокислотного анализа синтетических фрагментов белка Е2 вируса КЧС и прионного белка КРС 75
3.2.5. Смеси, созданные на основе пептидов, и МАР-конструкция 77
3.2.6. Антигенные свойства свободных пептидов -фрагментов белка Е2 вируса КЧС и их смесей. Иммуногенные свойства конъюгатов пептидов с белками-носителями, смесей и МАР-конструкции 79
3.2.7. Изучение возможности использования синтетических пептидов и смесей, созданных на их основе, для выявления антител к вирусу КЧС 84
3.2.8. Изучение иммуногенных свойств пептидов -фрагментов прионного белка КРС и смесей, созданных на их основе 95
3.2.9. Изучение возможности использования антител против синтетических фрагментов прионного белка КРС для выявления возбудителя ГЭ КРС иммуногистохимичес-ким методом 98
4. Обсуждение результатов 102
5. Выводы 113
6. Практические предложения 114
7. Список использованной литературы 115
Приложения 140
