Введение
1. Cигнальные пути фактора некроза опухоли (tnf-a) и его общие биологические свойства 8
1.1. Общие биологические свойства фактора некроза опухоли TNF-a 9
1.2. Активация транскрипционного фактора NF-кВ TNF-a 17
1.3. Образование вспомогательного комплекса при проведении сигнала рецептором TNF-R1 28
1.4. Липидные микродомены клеточной мембраны как функциональные модуляторы сигнальных путей семейства рецепторов TNF-a 32
1.5. Участие различных протеаз в сигнальных каскадах, индуцируемых TNF-a. 36
2. Результаты и обсуждение 40
2.1. Исследование дифференцирующей активности гексапептида TGENHR, L-глутаминовой кислоты и TNF-a на клетках линии IIL-60 41
2.2. Гексапептид TGENHR и L-глутаминовая кислота повышают TNF-опосредуемую активацию фосфолипазы С 45
2.3. Гексапептид TGENHR и L-Glu усиливают TNF-опосредованную экспрессию эндогенного фактора некроза опухоли 48
2.4. Влияние пептида TGENHR, L-глутаминовой кислоты и TNF-a на цикл клеточного деления 51
2.5. Исследование влияние гексапептида TGENHR и L-глутаминовой кислоты на TNF-индуцированную гибель HL-60 клеток 54
2.6. Исследование влияния TGENHR и L-Glu на TNF-индуцируемую активацию транскрипционного фактора NF-кВ 57
2.7. Влияние TGENIIR и L-Glu на TNF- опосредуемую активацию каспазы-3 и касиазы -8 60
2.8. Гексапептид TGENHR отменяет церамид-индуцированный апоптоз 63
2.9. Заключение 66
3. Экспериментальная часть 67
3.1 Материалы 68
3.2. Буферные растворы 69
3.3. Методы 70
3.3.1. Культивирование клеток 70
3.3.2. Определение дифференцирующей активности 70
3.3.3. Определение внутриклеточной концентрации ииозитолмоно- и дифосфатов в клетках линии HL-60 70
3.3.4. Приготовление агарозного геля 71
3.3.5. Выделение суммарной РНК 71
3.3.6. Получение кДНК из клеток 72
3.3.7. Полуколичественная конкурентная ПЦР 72
3.3.8. Обратной транскрипции ПЦР (RT-PCR) 74
3.3.9. Гель-электрофорез 75
3.3.10. Выделение продуктов ПЦР из геля 75
3.3.11. Определение уровня клеточной гибели 76
3.3.12. Определение апоптоза в клетках цитофлуориметрическим методом 76
3.3.13. Определение активности клеточных каспаз -8, -3 76
3.3.14. SDS-электрофорез белков в полиакриламидном геле 77
3.3.15. Иммуиоблот-анализ 77
3.3.16. Анализ цикла клеточного деления 78
3.3.17. Анализ экспрессии маркеров дифференцировки CD14 и CD16 79
Выводы 80
