Введение
ГЛАВА 1. Введение 4
1.1 Актуальность проблемы 4
1.2 Цель и задачи исследования 5
1.3 Научная новизна и практическая значимость работы
1.4 Апробация работы 7
ГЛАВА 2. Обзор литературы 8
2.1 В-лимфоциты в норме. Дифференцировка, созревание и иммунофенотип В клеток 8
2.1.1 Дифференцировка В-клеток 8
2.1.2 Синтез иммуноглобулинов. Антиген-независимый этап созревания В клеток 11
2.1.3 Антиген-зависимоый этап созревания В-клеток 13
2.1.4 В-клеточный рецептор и сигнальный каскад от него 15
2.1.5 Иммунофенотип В-клеток 18
2.2 В-клеточные опухоли. Дифференциальная диагностика. Гетерогенность в
группе CD5-положительных В-клеточных лимфом 22
2.2.1 Не-Ходжкинские лимфомы 22
2.2.2 Дифференциальная диагностика лимфом 24
2.2.3 Возможные предшественники СП5-положителъных лимфом 25
2.3 Биология передачи сигнала в CD5-положительных лимфомах 29
2.3.1 Строение В-клеточного рецептора СВ5-положителъных лимфом 29
2.3.2 Строение BCR-каскада СВ5-положителъных лимфом 30
2.4 Методические подходы к исследованию В-клеточных популяций 32
2.4.1 Клеточная сортировка чистых субпопуляций для анализа уровней экспрессии генов 32
2.4.2 Подходы к исследованию В-клеток при помощи ПЦР в реальном времени.
Проблема нормализации данных при анализе уровней экспрессии мРНК 34
ГЛАВА 3. Материалы и методы исследования 36
3.1 Пациенты и контроли 36
3.2 Гистология и иммуногистохимия 37
3.3 Проточная цитофлуориметрия
3.4 Клеточная сортировка 38
3.5 Получение РНК и кДНК 39
3.6 Подбор праймеров 39
3.7 ПЦР в реальном времени 41
3.8 Нормализация и статистический анализ 42
ГЛАВА 4. Результаты исследования 43
4.1 Классификация исследованных в работе опухолевых тканей и реактивных контролей 43
4.2 Определение уровней экспрессии мРНК генов сигнальных белков BCR каскада в опухолевой и реактивной лимфоидной ткани 51
4.3 Описание CD5+CD19+ популяции неопухолевых лимфоцитов миндалин 58
4.4 Сортировка нормальных и опухолевых В-клеток. Определение уровней экспрессии мРНК генов сигнальных белков BCR-каскада в чистых субпопуляциях 62
4.5 Совместный анализ данных по экспрессии мРНК генов сигнальных белков BCR-каскада в отсортированных и неотсортированных лимфоидных образцах 68
4.6 Анализ экспрессии ZAP-70 в CD5+CD19+ В-клетках миндалин методом проточной цитофлуориметрии 71
ГЛАВА 5. Обсуждение результатов 73
5.1 Опухолевые В-клетки В-ХЛЛ и ЛКМЗ имеют уникальный профиль экспрессии сигнальных белков 73
5.2 Клетки лимфом из «серой зоны» между В-ХЛЛ и ЛКМЗ отличаются как по экспрессии поверхностных антигенов, так и по уровням экспрессии сигнальных компонентов BCR-каскада 74
5.3 Характеристика CD5-положительных клеток миндалин 77
5.4 Уровни экспрессии генов сигнальных молекул BCR-каскада в норме и при патологии 78
ГЛАВА 6. Заключение 80
Выводы 82
Список сокращений и условных обозначений 83
Список литературы
