Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Патология сосудистой стенки 12
1.1.1. Заболевания артерий и их этиология 12
1.1.2. Клетки сосудистой стенки и их участие в реакциях на повреждение 14
1.1.2.1. Роль эндотелия в патологических изменениях сосудистой стенки 17
1.1.2.2. Роль клеток субэндотелиального слоя артерий в развитии 24 поражений сосудистой стенки
1.1.2.3. Роль макрофагов в формировании изменений сосудистой стенки 27
1.1.3. Значение процессов клеточной гибели в развитии патологии сосудистой стенки
1.1.4. Использование моделей для изучения функциональных особенностей клеток, участвующих в патологическом ремоделировании сосудистой стенки
1.2. Фотодинамическое воздействие 38
1.2.1. Понятие фотодинамического воздействия и его компоненты 38
1.2.2. Механизмы фотодинамического воздействия 40
1.2.3. Взаимодействие фотосенсибилизаторов и продуктов их активации с 44 клетками-мишенями
1.2.4. Проблемы и преспективы использования фотодинамического 49 воздействия для диагностики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний
Глава 2. Материалы и методы исследований 53
2.1. Используемое оборудование, материалы и реактивы 53
2.1.1. Оборудование 53
2.1.2. Химические реагенты 5 3
2.1.3. Антитела 54
2.1.4. Клеточные культуры 54
2.2. Приготовление сред для культивирования клеток 56
2.2.1. Приготовление полной среды 56
2.2.2. Приготовление среды для культивирования эндотелиальных клеток 56
2.2.3. Приготовление среды для криоконсервации клеток
2.3. Выделение и культивирование клеток сосудистой стенки человека 56
2.3.1. Получение первичной культуры эндотелиальных клеток пупочной вены человека
2.3.2. Получение первичной культуры эндотелиальных клеток аорты человека
2.3.3. Получение первичной культуры клеток субэндотелиального слоя аорты человека
2.3.4. Получение первичной культуры МСК из жировой ткани человека 58
2.3.5. Выделение лейкоцитов из периферической крови человека и получение первичной культуры макрофагов
2.3.6. Пассирование культивируемых клеток 60
2.3.7. Криоконсервация культивируемых клеток 60
2.4. Методы исследования 61
2.4.1. Определение накопления и выведения Фотосенса клетками 61
2.4.2. Определение накопления Протопорфирина IX клетками 62
2.4.3. Фотодинамическое воздействие на клетки сосудистой стенки 62
2.4.4. Проточная цитофлуориметрия 63
2.4.5. Иммуноцитохимическое окрашивание клеток 63
2.4.6. Выявление активных форм кислорода в клетках 65
2.4.7. Выявление апоптотических и некротических клеток 65
2.4.8. Определение жизнеспособности клеток методом МТТ-теста 66
2.4.9. Выявление митохондрий и лизосом 67
2.4.10. Изучение адгезии лейкоцитов периферической крови к эндотелию 67
2.4.11. Определение фагоцитарной активности макрофагов 67
2.4.12. Определение активности матриксных металлопротеиназ-2, 9 68
2.4.13. Исследование количественного содержания цитокинов в среде культивирования
2.5. Активированный эндотелий: клеточная модель и ее характеристика 70
2.6. Статистическая обработка результатов 71
Глава 3. Результаты и обсуждение 73
3.1. Изучение эффектов фотодинамического воздействия с использованием Фотосенса на клетки сосудистой стенки
3.1.1. Накопление Фотосенса клетками сосудистой стенки 74
3.1.2. Выведение Фотосенса клетками сосудистой стенки
3. Влияние компонентов фото динамического воздействия на клетки сосудистой стенки
4. Клеточные эффекты фотодинамического воздействия с использованием Фотосенса
5. Влияние дозы облучения при фото динамическом воздействии на механизм гибели клеток сосудистой стенки
Изучение влияния фотодинамического воздействия низкой интенсивности на функциональные свойства клеток сосудистой стенки
1. Влияние низких доз фотодинамического воздействия на жизнеспособность клеток сосудистой стенки
2. Влияние фотодинамического воздействия низкой интенсивности на адгезивные свойства эндотелиальных клеток
3. Функциональная активность макрофагов после фотодинамического воздействия низкой интенсивности
Сравнение эффектов фото динамического воздействия с использованием Фотосенса, Фталосенса и 5-аминолевулиновой кислоты на клетки сосудистой стенки
1. Накопление Протопорфирина IX в клетках сосудистой стенки 116
2. Влияние фотодинамического воздействия с использованием различных фотосенсибилизаторов на жизнеспособность клеток сосудистой стенки
Заключение 129
Выводы 133
Практические рекомендации 13 5
Список литературы
