Введение
Глава I. Обзор литературы 12
1.1. АГ и структурные изменения сосудистой стенки 13
1.1.1. Нормальная структура артериальной стенки 15
1.1.2. Пролиферация и апоптоз ГМК сосудов при АГ 16
1.1.3. Межклеточный фиброз сосудов при АГ 19
1.1.4. Формирование очагов воспаления в сосудах при АГ 20
1.2. Морфологические изменения сосудистой стенки во время атерогенеза.. 23
1.3. Теории патогенеза AT 27
1.3.1. Липопротеидная теория 29
1.3.2. Теория «реакция на повреждение» 30
1.3.3. Моноклональная теория 33
1.3.4. Иммунная теория 34
1.3.4.а. Инициаторы иммунного ответа в АТП 35
1.3.4.Ь. Врожденный иммунный ответ при атерогенезе 37
I.3.4.C. Адаптивный иммунный ответ при атерогенезе 46
1.4. Экспрессия основных генов-участников атерогенеза 51
1.4.1. Гены, влияющие на метаболизм липидов в артериальной стенке..51
1.4.2. Молекулы адгезии 54
1.4.3. Ростовые факторы 56
1.4.4. Цитокины и хемокины 58
1.4.5. Матриксные металлопротеиназы 59
1.4.6. Оксид азота 60
1.4.7. Система окисления/антиокисления в сосудах человека 61
1.4.8. Транскрипционные факторы 61
1.5. Изучение профиля генетического транскриптома при AT 63
1.5.1. Исследование атерогенеза методами DD и SAGE 63
1.5.2. Исследование атерогенеза с использованием ДНК-микрочипов 66
1.5.2а. Исследование атерогенеза на клеточных моделях 67
1.5.2Ь. Исследования атерогенеза на животных моделях 72
1.5.2с. Исследование атерогенеза у человека 73
1.6. Заключение 77
Глава II. Материалы и методы исследования 79
II.1. Образцы ЛПК 79
II.2. Получение и характеристика аутопсийного материала брюшного отдела аорты человека 80
II.З . Выделение суммарной РНК из ЛПК человека и из образцов интимы аорты человека 81
II.4. Проверка качества выделенной суммарной РНК 83
II.5. Приготовление кДНК-зондов для гибридизации с кДНК- микрочипами 84
11.6. Гибридизация кДНК-зондов с кДНК-микрочипами 85
11.7. Математическая обработка гибридизационных данных 86
II.8. Реакция ОТ 87
II.9.ПЦР 88
II. 10. Анализ продуктов ПЦР 89
II.11. Приготовление внешнего ПЦР-стандарта 89
II.12. Количественная ОТ-ПЦР с внешним стандартом 90
II 13. Иммуногистохимическое окрашивание 90
Глава III. Результаты 94
III.1. Пригодность образцов суммарной РНК для анализа молекулярно-биологическими методами 94
III. 1 .а. Моделирование распада РНК 95
III. 1 .Ь. Анализ изменений количеств индивидуальных мРНК методом ОТ-ПЦР в образцах суммарной Т24Р РНК с различным соотношением 28S и 18SpPHK 97
III. 1 .с. Корреляция между степенью распада (числом разрывов) рРНК и индивидуальных мРНК при различном соотношении 28S/18S рРНК 101
111.2. Обратные транскриптазы и их свойства 104
111.3. Сравнительный анализ транскриптомов нормальной и пораженной атеросклерозом интимы аорты человека в поисках дифференциально экспрессирующихся генов 115
111.4. Анализ транскриптома ЛПК больных эссенциальной гипертензией и сопоставление полученных данных с транскриптомом АТП аорты человека 135
III.5. Рїммуногистохимическое исследование экспрессии CD53 в нормальных и атеросклеротически измененной аорты человека 153
Глава IV. Обсуждение результатов 157
Выводы 196
Список литературы 199
Список сокращений 238
