Введение
1 Введение. 9
2 Обзор литературы: 18
2.1. Современные представления о молекулярных механизмах действия стероидных гормонов. 18
2.2. Лизосомы, особенности их строения и функционирования. 27
2.3. Свободнорадикальное окисление в норме и при патологии. 40
2.4. Липиды кожи. 42
2.5. Значение редокс-системы глутатиона для организма. 45
2.6. Современное состояние вопроса о возможном патогенезе псориаза 52
3 Материалы и методы исследования. 56
3.1. Подготовка тканей и клеток кожи для исследования. 56
3.2. Изучение проникновения 3Н-гидрокортизона, 3Н-эстрадиола, 3Н-прогестерона и 3Н-тестостерона через гематодермальный барьер. 57
3.2.1. Жидкостная сіщнтилляционная радиометрия. - 58
3.2.2. Очистка радиоактивных препаратов от возможных примесей. 59
3.3. Получение фракции лизосом фибробластов.
3.3.1. Анализ чистоты фракции лизосом 60
3.4. Исследование функциональной активности лизосом. 62
3.4.1. Выбор методических условий для определения активности ферментов в коже. 62
3.4.2. Определение активности лизосомальных гликозидаз. 63
3.4.3. Определение активности кислой фосфатазы. 77
3.4.4. Определение активности катепсина Д. 78
3.4.5. Определение активности фосфолипазы А2. 80
3.5. Изучение интенсивности перекисного окисления липидов. 80
3.5.1. Метод хемилюминесценции. 80
3.5.2. Метод определения антиокислительной активности. 82
3.5.3. Определение содержания ТБК-зависимых продуктов. 82
3.5.4. Определение уровня диеновых конъюгатов. 82
3.6. Определение параметров специфического связыва ния меченных стероидных гормонов с плазматиче скими и лизосомальными мембранами фибробластов кожи. 82
3.6.1. Определение параметров связывания меченых гормонов с фибробластами. 82
3.6.2. Определение параметров связывания меченых гормонов с лизосомами фибробластов кожи. 83
3.7. Изучение качественного и количественного состава липидов в тканях кожи. 84
3.7.1 Экстракция липидов из тканей кожи 84
3.7.2. Разделение липидов методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Silnfol V-254"/ 85
3.7.3. Идентификация и количественная оценка -различных классов липидов. 85
3.8. Определение уррвня внутриклеточного кальция с помощью зонда Fura-2. 86
3.8.1. Нагружение фибробластов зондом Fura - 2. 87
3.8.2. Расчет содержания ионов кальция в цитоплазме клеток 89
3.9. Определение активности компонентов редокссистемы глутатиона. 90
3.9.1. Определение содержания восстановленного глутатиона вдканях-кожи крыс. 90
3.9.2. Определение активности глутатион - перок-сидазы. 91
3.9.3. Определение активности глутатион-редуктазы. 92
3.10 Краткая характеристика синтетических шрмональных и антигормональных соединений. 93
3.11. Методы получения экспериментальных эндокринопатий. 94
3.12. Определение фаз эстрального цикла у самок крыс. 94
3.13. Определение белка 94
3.14. Статистическая обработка материата. 94
4 Результаты собственных исследований. 95
4.1. Влияние стероидных гормонов на параметры ряда физико-химических процессов в интактных тканях колеи. 95
4.1.1. Проницаемость гематодермального барьера для стероидных гормонов (гидрокортизо-на,эстрадиола, прогестерона и тестостерона). 95
4.1.2 Активность лизосомальных ферментов в тканях и фибробластах интактной кожи крыс. 98
4.12.1 Активность лизосомальных ферментов в тканях интактной кожи крыс 98
4.1.2.2 Активность ферментов лизосом в фибробла стах интактной кожи крыс. 104
4.1.3. Влияние стероидных гормонов на активность лизосомальных ферментов тканей кожи крыс. 104
4.1.4 Интенсивность перекисного окисления липидов в тканях кожи интактных крыс. 115
4.1.5. Влияние стероидных гормонов на интенсивность перекисного окисления лииидов в коже крыс. 121
4.1.6. Состояние редокс-системы глутатиона в тканях кожи интактных крыс. 143
4.1.7. Влияние стероидных гормонов на состояние редокс-системы глутатиона в тканях кожи крыс. 144
4.1.8. Исследование параметров связывания стероидных гормонов с плазматическими и лизо-сомальными мембранами фибробластов кожи крыс. 157
4.1.9. Влияние стероидных гормонов на липидный спектр лизосомальных мембран фибробластов кожи крыс. 159
4.1.10 Активность фосфолипазы А2 в норме и при действии стероидных гормонов. 163
4.1.11 Исследование влияния стероидных гормонов на базальный уровень кальция в фибробластах. 167
4.2 Показатели исследуемых физико - химических процессов в патологически измененной коше. 170
4.2.1. Активность лизсюомальных ферментов в тканях кожи человека в норме. 170
4.2.2. Активность ферментов лизосом и интенсивность перекисного окисления липидов в дерме и эпидермисе кожи детей, страдающих псориазом. 175
4.2.3. Липидный спектр в тканях кожи больных псориазом 179
4.2.4. РІсследование параметров биологических процессов в коже крыс при эксперимен тальном дерматите и влияние на них стероидных гормонов. 187
4.3. Поиск зффективньїх терапевтических средств для лечения заболеваний кожи путем изучения влияния новых синтетических препаратов с гор мональной и антигормональной активностью на физико-химические процессы в тканях кажи. 193
5 Обсуждение результатов. 197
Выводы 213
