Введение
Обзор литературы 8
1. Неупорядоченные белки 8
1.1. История открытия 8
1.2. Свойства неупорядоченных белков 13
1.3. Методы идентификации неупорядоченных белков 15
1.4. Функции неупорядоченных белков 18
2. Амилоидные и амилоидоподобные белки 21
2.1. Природные патогенные амилоидные белки и прионы 21
2.1.1. История изучения амилоидов 21
2.1.2. Методы идентификации и исследования структуры амилоидов...22
2.1.3. Структура амилоидных фибрилл 26
2.1.4. Олигомеризация амилоидных белков и цитотоксическое действие амилоидов 28
2.2. Функциональные амилоиды 32
3. Мультифункциональный белок YB-1 35
3.1. Структурная организация YB-1 35
3.2. Функции YB-1
3.2.1. Функции YB-1 в цитоплазме 40
3.2.2. Функции YB-1 в ядре 42
3.2.3. Транслокация YB-1 из цитоплазмы в ядро 44
3.2.4. Распределение YB-1 в цитоплазме и ядре 45
3.2.5. Секреция YB-1 из клеток 47
3.2.6. Участие YB-1 в эмбриональном развитии 47
3.2.7. Связь YB-1 с онкогенезом 48
3.3. Молекулярные основы многофункциональности YB-1 51
3.3.1. Взаимодействие YB-1 с нуклеиновыми кислотами 51
3.3.2. Взаимодействие YB-1 с белками 54
3.3.3. Посттрансляционные модификации YB-1 56
Материалы и методы 58
1. Генетические конструкции, использованные в работе 58
2. Получение белка YB-1 и его фрагментов 58
3. Электрофорез белков в полиакриламидном геле в присутствии SDS 61
4. Спектроскопия кругового дихроизма 62
5. Дифференциальная сканирующая микрокалориметрия 62
6. Спектроскопия ЯМР 62
7. Малоугловое рентгеновское рассеяние 62
8. Аналитическое ультрацентрифугирование 63
9. Аналитическая гель-фильтрация 63
10. Электронная микроскопия 64
11. Атомно-силовая микроскопия 64
12. Флуоресцентная микроскопия 64
13. Окраска конго красным 65
14. Дифракция рентгеновских лучей на ориентированных препаратах 65
15. Анализ образования амилоидов по флуоресценции тиофлавинаТ 66
16. Диссоциация фибрилл 66
Результаты 67
1. Исследование белка YB-1 в растворе 67
1.1. А/Р-домен и CTD белка YB-1 предсказываются как неупорядоченные67
1.2. Спектры кругового дихроизма указывают на большое содержание клубкообразной формы и структуры поли(Ъ)-пролиновой спирали второго типа 69
1.3. Домен холодового шока белка YB-1 обладает низкой стабильностью и претерпевает денатурационный переход как при нагревании, так и при охлаждении 70
1.4. YB-1 в растворе обладает высокой степенью компактности 73
1.5. Олигомеризация YB-1 74
2. Формирование фибрилл белком YB-1 76
2.1. Белок YB-1 способен образовывать протяженные фибриллы с участием домена холодового шока 76
2.2. Фибриллы YB-1 являются амилоидоподобными 79
2.3. Исследование процесса образования фибрилл YB-1 82
2.4. Влияние различных катионов на рост амилоидоподобных фибрилл YB-1 84
2.5. При понижении ионной силы фибриллы YB-1 распадаются 85
Обсуждение результатов 88
1. Белок YB-1 является нативно неупорядоченным белком 88
2. Возможные причины компактности YB-1 89
3. Роль ионной силы в фибриллообразовании 91
4. Способность YB-1 к амилоидообразованию может быть обусловлена низкой стабильностью домена холодового шока 92
5. Особенности роста фибрилл 93
6. Возможная структура амилоидов YB-1 93
7. Возможное значение способности YB-1 образовывать амилоидоподобные структуры 94
Выводы 97
Список литературы
