Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1 Лакказы в природе 9
1.2 Физико-химические свойства лакказ 10
1.3 Каталитические свойства лакказ. Механизм действия
1.3.1 субстратная специфичность лакказ 12
1.3.2 PH-зависимость каталитической активности лакказ 14
1.3.3 Ингибиторы лакказ 16
1.3.4 Механизм действия лакказ 17
1.3.5 Окислительно-восстановительный потенциал медь-содержащих центров лакказ 20
1.4 Структура лакказ 22
1.4.1 Первичная структура лакказ 22
1.4.2 Исследование лакказ методом рентгеноструктурного анализа 23
1.4.3 Третичная структура лакказ. Доменная организация 26
1.4.4 Четвертичная структура лакказ 31
1.4.5 Строение т1 центра лакказ 33
1.4.6 Влияние окружения т1 центра на редокс потенциал и каталитические свойства лакказ 35
1.4.7 Строение центра связывания фенольных субстратов. Структуры комплексов лакказа-фенольный субстрат 39
1.4.8 Строение t2/t3 кластера лакказ 41
1.4.9 Каналы, связывающие т2/т3 кластер лакказ с поверхностью белка 43
1.4.10 Т2-деплецированные формы лакказ 45
1.4.11 Гликозилирование лакказ 48
1.4.12 Структуры мутантных форм лакказ 49
1.5 Лакказа из аскомицета botrytis aclada 50
ГЛАВА 2. Материалы и методы 54
2.1 Реактивы 54
2.2 Препараты лакказы из аскомицета botrytis aclada, использованные в работе (объект исследования) 54
2.3 Определение лакказной активности 55
2.4 Определение концентрации белка в растворе 56
2.5 Гель-фильтрация ферментов 56
2.6 Окрашивание sds-page гелей по углеводной части 57
2.7 Кристаллизация лакказы из b. Aclada методом диффузии пара 57
2.8 Получение комплексов лакказы из b. Aclada методом вымачивания кристаллов. 58
2.9 Сбор дифракционных данных и решение структур 58 глава 3. Результаты и обсуждение: 62
3.1 Молекулярные свойства препаратов лакказы из b. Aclada и её мутанта leu499met 62
3.2 Сравнительная характеристика кинетических свойств лакказы из b. Aclada и её мутанта leu499met 64
3.3 Первичная структура лакказы из b. Aclada 66
3.4 Определение олигомерного состава лакказы из b. Aclada методом гель-фильтрации 69
3.5 Кристаллизация лакказы из b. Aclada и её мутанта leu499met 71
3.6 Пространственнная структура лакказы из b. Aclada 73
3.7 Димерная структура лакказы из b. Aclada 75
3.8 Гликозилирование лакказы из b. Aclada 77
3.9 Сравнение структуры лакказы из b. Aclada с другими лакказами 80
3.10 Активный центр лакказы из b. Aclada 82
3.11 Строение т1 центра в лакказе из b. Aclada и её мутанте leu499met 86
3.12 Строение т2/т3 кластера лакказы из b. Aclada 89
3.13 Встраивание иона меди в т2 центр лакказы из b. Aclada 90
3.14 Ингибирование лакказы из b.aclada галогенид-ионами. Структурные факторы, влияющие на ингибирование 91
Заключение: 95
Список литературы: 96
