Введение
1 Обзор литературы
1. Ковал ентные структуры хромофоров цветных гомологов зелёного флуоресцентного белка (GFP) как ключ к происхождению и механизмам эволюции семейства GFP- подобных белков
1.1.Введение 6
1.2. Структуры и свойства GFP и его гомологов. Структуры хромофоров GFP-подобных белков 7
1.3.Спектральные свойства GFP-подобных белков, вьщеляемых из них хромопептидов и синтетических модельных хромофоров 13
1.4.Некоторые свойства JV-ацилиминов 28
1.5.Фрагментация полипептидных цепей жёлтого и красных гомологов GFP 36
1.6. Роль отдельных аминокислотных остатков в последовательностях гомологов GFP в формировании их хромофоров и в их спектральных свойствах, выявляемая методами направленного и статистического мутагенеза 44
1.7.Структуры хромофоров жёлтого (zFP538) и пурпурного (asFP595) гомологов GFP и возможные механизмы их образования 49
1.8.Природные имидазо[1,2-а]пиразины, их синтетические аналоги и вопросы биосинтеза 57
1.9. Гипотезы о происхождении и эволюции семейства GFP-подобных белков: проблемы и перспективы 63
1.10.Заключение 69
2 Экспериментальная часть
2. Материалы и методы 71
3. Результаты и их обсуждение
3.1. Экспрессия и выделение флуоресцентных белков 78
3.2. Денатурация zFP538, DsRed и asFP595, ферментативный гидролиз белков и вьщеление хромопептидов 79
3.3. Хромофорсодержащие пептиды, выделенные из белка zFP538 82
3.3.1. Аминокислотный и масс-спектрометрический анализ хромопептидов из ZFP538 82
3.3.2. Спектры поглощения и флуоресценции хромопептидов из zFP538 84
3.3.3. Исследования хромопептидов, выделенных из zFP538, методом спектроскопии ЯМР 88
3.3.4. Структуры хромофорсодержащих пептидов из zFP538 93
3.3.5. Подтверждение структуры хромопептидагРР538-Ш 102
3.4. Фрагментация полипептидной цепи zFP538 117
3.5. Направленный мутагенез zFP538 HZFP506 128
3.6. Свойства хромопептидов, вьщеленных из DsRed и asFP595, и их структуры. Фрагментация полипептидной цепи asFP595 131
3.7. Структура хромофора asFP595 143
3.8. Структура хромофора zFP538 146
Выводы 155
