Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Фоторецепторные системы растений 10
1.1.1. Структура и свойства фитохрома 11
1.1.2. Механизм передачи фитохромного сигнала 14
1.1.3. Реализация фитохромного сигнала в клетке 17
1.1.4. Влияние света на темновое дыхание . 20
1.1.4.1. Влияние света на активность цикла трикарбоновых кислот 23
1.2. Общая характеристика сукцинатдегидрогеназной системы 25
1.2.1. Метаболические пути, в которых участвует 25
сукцинатдегидрогеназа
1.2.2. Структура белковой молекулы сукцинатдегидрогеназы 28
1.2.3. Генетическая детерминация сукцинатдегидрогеназы 37
1.3. Молекулярные аспекты регуляции сукцинатдегидрогеназы 39
1.3.1. Регуляция работы фермента интермедиатами клетки 40
1.3.2. Регуляция сукцинатдегидрогеназны светом . 42
1.3.3. Регуляция сукцинатдегидрогеназы на генетическом уровне 45
Глава 2. Экспериментальная часть 48
2.1 Цели и задачи 48
2.2 Объекты исследования 49
2.2.1 Объекты исследования 49
2.2.2 Постановка эксперимента по созданию светового режима 49
2.2.3 Определение активности фермента 51
2.2.5 Схема очистки сукцинатдегидрогеназы из зеленых листьев кукурузы
2.2.6 Электрофоретическое исследование очищенного препарата фермента
2.2.7 Экстракция суммарной РНК из листьев растений 54
2.2.8 Проведение обратной транскрипции 55
2.2.9 Подбор специфических праймеров 55
2.2.10 Проведение полимеразной цепной реакции 55
2.2.11 Секвенирование ПЦР-продукта 56
2.2.12 Проведение Нозерн дот-гибридизации 56
2.2.13 Проведение ПЦР в реальном времени 57
2.2.14 Статистическая обработка данных 57
2.3 Результаты и их обсуждение 58
2.3.1 Действие гетерогенного света на активность 59
сукцинатдегидрогеназы
2.3.1.1 Влияние гетерогенного света на активность 59
сукцинатдегидрогеназы в листьях кукурузы
2.3.1.2 Изменение активности сукцинатдегидрогеназы листьев кукурузы при смене светового режима 59
2.3.1.3 Активность сукцинатдегидрогеназы в листьях кукурузы, экспонируемой в условиях «темнота-свет» 62
2.3.1.4 Динамика активности сукцинатдегидрогеназы в листьях кукурузы при деэтиоляции растений 64
2.3.2. Очистка и физико-химические свойства СДГ 66
2.3.2.1 Влияние белого света на активность изолированного препарата фермента сукцинатдегидрогеназы 69
2.3.2.2 Очистка фермента из листьев кукурузы 69
2.3.2.3 Действие гетерогенного света на изолированную молекулу сукцинатдегидрогеназы 69
2.3.2.4 Влияние АТФ на активность изолированной 72
су кци натдеги дро геназы
2.3.2.5 Действие АДФ на активность сукцинатдегидрогеназы 73
2.3.2.6 Влияние различных солей на активность сукцинатдегидрогеназы
2.3.2.7 Влияние хлорида калия на активность сукцинатдегидрогеназы
2.3.3 Роль фитохромной системы в регуляции активности сукцинатдегидрогеназы в растениях в условиях различного светового режима
2.3.3.1 Влияние КС и ДКС на активность сукцинатдегидрогеназы
в листьях кукурузы
2.3.3.2 Влияние КС и ДКС на функционирование сукцинатдегидрогеназнои системы в листьях арабидопсиса дикого типа
2.3.3.3 Влияние КС и ДКС на сукцинатдегидрогеназу в листьях арабидопсиса, мутантного по гену фитохрома А
2.3.3.4 Влияние КС и ДКС на сукцинатдегидрогеназу листьев арабидопсиса мутантный по гену фитохрома В
2.3.4 Механизм регуляции активности сукцинатдегидрогеназы фитохромной системой 96
2.3.4.1 Идентификация гена, кодирующего субъединицу А сукцинатдегидрогеназы в листьях кукурузы
2.3.4.2. Секвенирование продукта, полученного методом пцр с ген-специфицескими праймерами 101
2.3.4.3 Механизм регуляции экспрессии сукцинатдегидрогеназы 103
2.3.4.3.1 Изменение количества мрнк гена sdhl-2 при разных 103 световых режимах
2.3.4.3.,2 Изменение экспрессии сукцинатдегидрогеназы в 106 листьях арабидопсиса при разных световых режимах
2.3.4.3.3 Уровень экспрессии сукцинатдегидрогеназы в листьях 112 кукурузы в разных условия освещения
Заключение 118
Выводы 122
Литература
