Введение
Глава 1. Фотофизические параметры сывороточных альбуминов в нативном состоянии, при связывании лигандов и денатурации (обзор литературы) 10
1.1 Альбумин. Особенности структуры молекулы и основные лигандыЮ
1.1.1 Структура молекулы альбумина 12
1.1.2 Изменение структуры молекулы альбумина при патологических изменениях в организме человека 13
1.2 Фотофизические параметры молекул 15
1.2.1 Электронные переходы в молекулах 15
1.2.2 Электронные состояния ароматических соединений 18
1.3 Оптические методы исследования структуры белков 1.3.1 Абсорбционные методы 24
1.3.2 Флуоресцентные методы 26
Глава 2. Исследование фотофизических параметров альбумина в водном растворе для разработки метода регистра ции конформационных изменений белка под действием анионного детергента 31
2.1 Изменение структуры альбумина при взаимодействии с детер гентами 31
2.2 Диагностика конформационных изменений альбумина в присутствии детергента методом стационарной флуоресцентной спек троскопии 32
2.3 Диагностика конформационных изменений альбумина в присутствии детергента абсорбционными методами 39
2.4 Диагностика конформационных изменений альбумина в присутствии детергента с помощью время-разрешённой флуоресцентной спектроскопии з
2.5 Структурные изменения молекулы альбумина при его анфолдин ге, приводящие к усилению флуоресценции тирозиновых остатков44
2.6 Выводы по главе 2 46
Глава 3. Фотофизические параметры альбуминов в различных модельных системах 48
3.1 Влияние связывания катионного детергента на собственную флуоресценцию альбуминов 49
3.2 Влияние связывания ионов двухвалентных металлов на собственную флуоресценцию альбуминов 52
3.2.1 Влияние ионной силы на собственную флуоресценцию альбуминов 53
3.2.2 Влияние катионов свинца на собственную флуоресценцию альбумина 53
3.3 Собственная флуоресценция альбумина в зависимости от рН рас твора 57
3.3.1 Изменение структуры белка в зависимости от рН раствора 58
3.3.2 Изменение флуоресценции свободных ароматических аминокислот (триптофана и тирозина) в зависимости от рН раствора 61
3.3.3 Изменение собственной флуоресценции за счёт структурных переходов молекул сывороточных альбуминов в зависимости от рН раствора 63
3.4 Собственная флуоресценция альбумина в присутствии этанола 65
3.4.1 Изменение структуры альбумина в присутствии этанола 66
3.4.2 Определение интермедиата БСА в водно-этанольном растворе по флуоресценции Нильского красного 68
3.4.3 Изменение оптических свойств альбумина в присутствии этанола 69
3.5 Собственная флуоресценция альбумина при денатурации гидрохлоридом гуанидина 72
3.5.1 Изменение структуры альбумина под действием гидрохлорида гуанидина 73
3.5.2 Изменение оптических свойств альбумина под действием гидрохлорида гуанидина 75
3.6 Выводы по главе 3 76
Глава 4. Тирозиновая флуоресценция как индикатор конформа ционных изменений альбумина в плазме крови 79
4.1 Концентрация жирных кислот в плазме крови 79
4.2 Тирозиновая флуоресценция плазмы крови 80
4.3 Оценка увеличения интенсивности тирозиновой флуоресценции альбумина при присоединении лигандов в сайты жирных кислот 83
4.4 Выводы по главе 4 86
Заключение 88
Приложение
