Введение
1. Современные представления о надмолекулярной организации ферментов 22
1.1 Уровни структурной организации ферментов 22
1.2 Функциональные последствия объединения ферментов в надмолекулярные комплексы 25
1.3 Надмолекулярные комплексы ферментов цикла Кальвина 36
2. Материалы и методы 56
2.1 Объекты исследования 56
2.2 Методы исследования 56
2.2.1 Реактивы 56
2.2.2 Определение количественного содержания белка по методу Лоури 57
2.2.3 . Микроопределение белка с биуретовым реактивом 58
2.2.4 Определение неорганического фосфора 58
2.2.5 Определение активности рибозофосфатизомеразы 59
2.2.6 Определение фосфорибулокиназной активности 60
2.2.7 Определение карбоксилазной активности рибулозо-1,5-бисфосфаткарбокислазы/оксигеназы радиометрическим методом 61
2.2.8 Определение карбоксилазной активности рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы спектрофотометрическим методом 62
2.2.9 Определение оксигеназной активности рибулозо-1,5-бмсфосфаткарбоксилазы/оксигеназы 62
2.2.10 Определение активности глицеральдегидфосфатдегидрогеназы 63
2.2.11 Синтез рибулозо-5-фосфата - субстрата фосфорибулокиназной реакции 64
2.2.12 Выделение и очистка свободного мультиферментного комплекса из листьев хлопчатника 65
2.2.13 Выделение и очистка в денатурирующих условиях свободного мультиферментного комплекса из листьев хлопчатника 70
2.2.14 Выделение и очистка мембраносвязанного мультиферментного комплекса из листьев хлопчатника 74
2.2.15 Определение содержания рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы методом ракетного иммунофореза 77
2.2.16 Определение гомогенности ферментных препаратов и их молекулярной массы 77
2.2.17 Фракционирование мембран хлоропластов из листьев картофеля 79
2.2.18 Определение количества рибулозо-1.5-бисфосфаткарбокси-лазы/оксигеназы, ассоциированной с мембранами 81
2.2.19 Количественное определение содержания хлорофилла 81
2.2.20 Определение константы Михаэлиса 82
2.2.21 Определение коэффициента Хилла 82
2.2.22 Статистическая обработка данных
3. Ферментативные активности свободных мультиферментных комплексов цикла кальвина в онтогенезе растений хлопчатника 83
3.1 - Онтогенетические изменения ферментативных активностей свободного мультиферментного комплекса 84
3.2 Онтогенетические изменения ферментативных активностей свободного мультиферментного комплекса, выделенного в денатурирующих условиях 95
4. Мембраносвязанная рибулозо-1,5- яжгфосфаткарбоксилаза/оксигеназа листьев картофеля 108
4.1 Активность мембраносвязанной рибулозо-1,5-бмсфосфаткарбоксилазы/оксигеназы в процессе формирования системы внутренних мембран хлоропластов картофеля 110
4.2 Реконструкция in vitro мембраносвязанной рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы из мембран и свободной формы фермента 111
4.3 Содержание и активность свободной и мембраносвязанной риб; 1,5-бмсфосфаткарбоксилазы/оксигеназы листьев картофеля в связи с продуктивностью 122
5. Мембраносвязанныи мультиферментньш комплекс цикла кальвина из листьев хлопчатника 129
5.1 Определение гомогенности и молекулярной массы одновременно выделенных мультиферментных комплексов -свободного и мембраносвязанного 129
5.2 Сравнительные определения ферментативных активностей свободного и мембраносвязанного мультиферментных комплексов 137
5.3 Кинетическое поведение рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/ оксигеназы в свободном и мембраносвязанном мультиферментных комплексах 142
Заключение 152
