Введение
3. Обзор литературы 9
Липосомы, как средство доставки лекарственных препаратов 9
З.1. Свойства мембраны 9
3.2. Получение липосом и основные способы загрузки веществ 11
3.3, Классические липосомы 15
3.4 Стерически стабилизированные или Stealth-липосомы 19
3.5. Активно нацеленные липосомы 21
3.5.1. Липосомы, нацеленные с помощью антител 22
3.5.2. Липосомы, нацеленные с помощью других лигандов 24
3.6. Липосомы с контролируемым высвобождением 24
3.6.1. Термочувствительные липосомы 25
3.6.2. рН-Чувствительные липосомы 26
3.7. Активная загрузка липосом , 32
3.7.1. Загрузка липосом с помощью рН-градиента 32
3-7.2, Вторичный рН-градиент»... 38
3.7.3. Загрузка липосом с помощью градиента сульфата аммония 39
4. Результаты работы и их обсуждение ,.43
4.1. Оптимизация полупромышленного метода получения стерически стабилизированных термочувствительных активно загруженных доксорубицином липосом 44
4.1.1. Выбор метода получения первичной дисперсии мультиламеллярных липосом с сульфатом аммония 45
4.1.2. Формирование дисперсии одноламеллярных липосом с сульфатом аммония ,„.46
4.1.З. Создание градиента концентрации сульфата аммония 47
4.1 А Состав буферного раствора дты проведения загрузки липосом доксорубицином 47
4.1.5. Температурный режим загрузки 48
4.1.6. Оценка высвобождения доксорубицина 49
4.1.7- Биологические испытания полученной дисперсии 53
4.2. Создание и обработка методики получения стерически стабилизированных липосомальных препаратов доксорубицина с возможностью иммобилизации химерных белков с доменом барназы 57
4.3. Оценка эффективности комбинированной терапии опухолей при одновременном использовании липосомальных препаратов с различными действующими началами „„65
4.4. Влияние мочевины на стабильность липосомальной дисперсии 68
4.4.1. Флуоресцентные исследования 69
4.4.2, Оценка микровязкости лапосомального бислоя 70
4.43. Влияние мочевины на активную загрузку липосом доксорубицином при
использовании градиента сульфата аммония 72
5- Экспериментальная часть 74
5.1. Материалы и методы , 74
5.2. Оптимизация полупромышленного метода получения стерически стабилизированных термочувствительных активно загруженных доксорубицином липосом 75
5.2.1. Получение липосом 75
5.2.2. Определение степени загрузки доксорубицина , 82
5.2.3. Определение размера липосом 83
5.2.4. Оценка термочувствительных свойств полученных липосом 83
5-2.5. Определение степени высвобождения доксорубицина из липосом при 43С 83
5.2.6. Биологические испытания 84
5.3. Создание и отработка методики получения стерически стабилизированных липосомальных препаратов доксорубицина с возможностью иммобилизации химерных белков с доменом барназы 86
5.3.1. Контрольный эксперимент 87
5.3.2. Электрофорез 87
5.3.3. Получение электронных микрофотографий 88
5.4. Оценка эффективности комбинированной терапии опухолей при одновременном использовании липосомальных препаратов с различными действующими началами,... 89
5.4.1. Получение липосом с доксорубицином 89
5А2. Получение липосом с аигиостатином , 89
5.4.3. Определение эффективности загрузки 89
5.4.4. Схема эксперимента in vivo 90
5.5. Влияние мочевины на стабильность липосомальпой дисперсии 92
5.5.1. Оценка микровязкости липосомального бислоя 92
5.5.2. Влияние мочевины на активную загрузку липосом доксорубицином при использовании градиента сульфата аммония 93
6. Выводы , 95
7. Благодарности 96
8. Литература 97
