Введение
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 20
1.1. Проблема вирусного гепатита А и его лабораторная диагностика 20
1.2. Анализ лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки и детекции её возбудителя 43
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. 62
2.1. Объекты исследования, взятые в работу 62
2.2. Биологическое сырье и основные химические реактивы... 63
2.3. Аппаратное оснащение исследований 63
2.4. Экспериментальные и коммерческие тест-системы для диагностики вирусного гепатита А и Крымской геморрагической лихорадки и детекции их возбудителей 68
2.5. Характеристика основных реагентов, используемых
для получения магноиммуносорбентов 69
2.6. Методы контроля антигенов и сывороток 70
2.7. Методы выделения иммуноглобулинов 70
2.8. Получение иммуноферментных конъюгатов и контроль
их активности 70
2.9. Физико-химические методы 71
2.10. Лиофилизация биологического материала 71
2.11. Методы математической и статистической обработки
полученных результатов 72
Глава 3. РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕСТ-СИСТЕМЫ МАГНОИММУНОСОРБЕНТНОЙ ГЕПАТИТНОЙ ДЛЯ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ В
ИФА 73
3.1. Разработка биотехнологии получения полиакрила- мидного магнитного сорбента 73
3.1.1. Подбор методов выделения иммуноглобулинов ішасса G 77
3.1.2. Получение полиакриламидных гепатитных магноим-муносорбентов 79
3.1.3. Технические устройства и методические приемы для работы с МИС 81
3.1.4. Проведение иммуноферментного анализа 86
3.1.5. Применение гепатитной магноиммуносорбентной полиакриламидной тест-системы 91
3.2. Получение и применение гепатитных композиционных магноиммуносорбентов (ГКМИС) 96
3.2.1. Разработка биотехнологии получения гепатитных композиционных магноиммуносорбентов 98
3.2.2. Характеристика гепатитного диагностикума на основе композиционных магноиммуносорбентов и его
применение 107
Глава 4. ИЗУЧЕНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ ИФА И ПЦР ПРИ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДО ВАНИЯХ НА КРЫМСКУЮ ГЕМОРРАГИЧЕСКУЮ
ЛИХОРАДКУ КЛИНИЧЕСКОГО И ПОЛЕВОГО МАТЕРИАЛА, РАЗРАБОТКА МЕТОДОЛОГИИ ИХ КОМПЛЕКСНОГО ПРИМЕНЕНИЯ 113
4.1. Разработка методов подготовки клинического и полевого
материала для проведения исследований 114
4.2. Разработка методологии комплексного использования ИФА и ОТ-ГЩР при диагностике Крымской геморра гической лихорадки 117
4.3. Разработка методов детекции вируса Крымской геморрагической лихорадки в полевом материале, полученном из природных очагов некоторых регионов Юга России.... 134
4.4. Серологическое исследование крови и органов млеко питающих и птиц в природном очаге КГЛ Ставропо льского края 148
Глава 5. РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕСТ- СИСТЕМЫ МАГНОИММУНОСОРБЕНТ-НОЙ ДЛЯ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ КРЫМСКОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ В ИФА 152
5.1. Разработка композиционного магноиммуносорбента
на основе алюмосиликата 152
5.2. Разработка метода селективного концентрирования на
магноиммуносорбенте с последующей постановкой
иммуноферментного анализа 162
Глава 6. РАЗРАБОТКА СОЧЕТАННОГО МЕТОДА ДЕТЕКЦИИ ВИРУСОВ ПУТЕМ СЕЛЕКТИВНОГО КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ НА МАГНОИММУНОСОРБЕНТЕ С ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ПОСТАНОВКОЙ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ С ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИЕЙ (ОТ-ПЦР) 172
6.1. Разработка и проведение сочетанного метода
МИС + ПЦР для детекции вируса гепатита А 173
6.2. Разработка и проведение сочетанного метода
МИС + ПЦР для детекции вируса Крымской
геморрагической лихорадки 180
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 187
ВЫВОДЫ 206
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 209
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 210
