Введение
Глава 1. Литературный обзор 11
1.1. Физико-химические методы исследования структуры биополимеров 11
1.2. Введение в импульсный ЭПР 13
1.3. Импульсные последовательности ЭПР-спектроскопии 17
1.3.1. PELDOR 17
1.3.2. DQC 18
1.3.3. SIFTER 20
1.3.4. Стимулированное эхо 21
1.3.5. RIDME 22
1.4. Парамагнитные спиновые метки 23
1.4.1. Нитроксильные радикалы 23
1.4.2. Триарилметильные радикалы 27
1.4.3. Способы введения меток в биомолекулу (SDSL) 30
1.5. Подходы для структурных ЭПР-исследований при комнатной температуре 33
1.6. Заключение 36
Глава 2. Электронная спиновая релаксация тритильных радикалов 38
2.1. Введение 38
2.2. Экспериментальная часть 40
2.3. Результаты и обсуждение 43
2.3.1. Стационарные ЭПР-спектры 43
2.3.2. Электронная спиновая релаксация в жидкости 49
2.3.2.1. Зависимость релаксации от вязкости растворителя 49
2.3.2.2. Зависимость релаксации от дейтерирования радикала и растворителя 49
2.3.2.3. Зависимость релаксации от полярности растворителя 50
2.3.2.4. Зависимость релаксации от структуры радикала 51
2.3.2.5. ЭПР-спектры в замороженном растворе 52
2.3.2.6. Механизм релаксации в жидкости 53
2.3.3. Электронная спиновая релаксация в трегалозе 55
2.3.3.1. Температурная зависимость времени релаксации 55
2.3.3.2. ESEEM-измерения при комнатной температуре 57
2.3.3.3. Механизмы релаксации в трегалозе 58
2.4. Заключение 63
Глава 3. Особенности взаимодействия тритильных меток с нуклеиновыми кислотами 64
3.1. Введение 64
3.2. Экспериментальная часть 66
3.3. Результаты и обсуждение 69
3.3.1. Стационарные спектры ЭПР при 298K 69
3.3.2. Влияние природы радикала на распределение по расстояниям 71
3.3.3. Влияние природы линкера на распределение по расстояниям 73
3.3.4. ЭПР-исследования при 180 ГГц 75
3.3.5. ЭПР-исследования при 260 ГГц 77
3.3.6. Сопоставление ЭПР-результатов с молекулярной динамикой 79
3.4. Заключение 81
Глава 4. Исследование спин-меченных нуклеиновых кислот при комнатной температуре 82
4.1. Введение 82
4.2. Экспериментальная часть 84
4.3. Результаты и обсуждения 87
4.3.1. Иммобилизация спин-меченного ДНК-дуплекса 87
4.3.2. Времена фазовой релаксации при комнатной температуре 92
4.3.3. Дипольные ЭПР-измерения при комнатной температуре 94
4.4. Заключение 102
Результаты и выводы 103
Список литературы 104
Благодарности 119
Приложение 120
