Введение
ГЛАВА 1. Особенности строения лигноцеллюлозных субстратов 9
1. Полисахариды клеточной стенки 10
1.1. Целлюлоза 10
1.2. Гемицеллюлозы 10
1.3. Пектиновые вещества 14
2. Лигнин 16
ГЛАВА 2. Микробиологическая деструкция лигноцеллюлозных субстратов 21
ГЛАВА 3. Ферменты, принимающие участие в биоконверсии лигноцеллюлозных субстратов 21
1. Гидролитические ферменты 21
1.1. Карбогидразы 21
1.2. Эстеразы 22
1.2.1. Ацетилксиланэстеразы 22
1.2.2. Ферулоилэстераза 23
2. Окислительные ферменты 27
2.1. Лигнинпероксидаза 30
2.2. Mn-зависимая пероксидаза 32
2.3. Mn-ингибируемая пероксидаза 35
2.4. Фенолоксидазы (тирозиназа и лакказа) 36
2.5. Арилалкогольоксидаза 36
3. Перекись-продуцирующие ферменты, окисляющие углеводы 37
ГЛАВА 4. Неферментативные механизмы окисления лигнина экспериментальная часть
Глава 5. Объекты и методы исследования 40
5.1. Объекты исследования 40
5.2. Выделение чистых культур С. unicolor, D. confragosa 41
5.3. Условия культивирования грибов белой гнили 41
5.4. Приготовление инокулюма и отбор проб КЖ грибов белой гнили 42
5.5. Исследование ММР лигносульфонатов КЖ грибов белой гнили и продуктов гидролиза природных субстратов ферулоилэстеразой A. heteromorphus методом ГПХ 43
5.6. Методы измерения ферулоилэстеразной активности. Предобработка природных субстратов для действия
ферулоилэстеразы 44
5.6.1. Гидролиз метилового эфира феруловой и л-кумаровой кислот 44
5.6.2. Гидролиз ферулоиларабинозида 44
5.6.3. Гидролиз природных субстратов 45
5.6.4. Определение общего содержания феруловой
кислоты в составе природных субстратов 45
5.6.5. Обращеннофазовая хроматография 46
5.6.6. Определение деацетилирующей активности 46
5.7. Методы определения ксиланазной активности 46
5.7.1. Гидролиз КМЦ и глюкуроноксилана березы 46
5.7.2. Гидролиз МУФ-производных 47
5.7.3. Гидролиз п-НФ производных 47
5.8. Определение рН и температурного оптимумов ферулоилэстеразы и ксиланазыА heteromorphus 47
5.9. Методы определения Мп-пероксидазной активности 48
5.9.1. Окисление MnS04, температурная стабильность. и рН-оптимум МП В, adusta 48
5.9.2. Окисление фенолового красного 48
5.9.3. Активность по отношению к гваяколу 48
5.9.4. Определение активности МП по отношению к другим субстратам 49
5.10. Методы определения пероксидазной и лакказной активности 49
5.11. Определение лигнинпероксидазной активности 49
5.12. Определение арилалкогольоксидазной активности 49
5.13. Выделение гомогенной Мп-пероксидазы В. adusta 90-41 50
5.13.1. Ионообменная хроматография 50
5.13.2. Хроматофокусирование 50
5.14. Выделение гомогенной ферулоилэстеразы и ксиланазыА heteromorphus 51
5.14.1. Ионообменная хроматография 51
5.14.2. Выделение ферулоилэстеразы A. heteromorphus методом гидрофобной хроматография 52
5.14.3. Выделение ксиланазы A. heteromorphus методом гиброфобной хроматографии 52
5.15. ДДС-ПААГ электрофорез и изоэлектрофокусирование 52
5. 15. Субстраты и реактивы 53
ГЛАВА 6. Общие закономерности роста грибов белой гнили на среде с лигносульфонатами 54
6.1. Ферменты, продуцируемые грибами белой гнили 54
6.2. Трансформация лигносульфонатов под действием грибов 57
6.3. Сопоставление данных ГПХ с ферментативной активностью грибов белой гнили 66
6.4. Роль Н2О2 и супероксид-аниона в процессах деструкции/полимеризации лигносульфонатов культурой В adusta 67
ГЛАВА 7. Выделение и свойства МП-пероксидазы В. Adusta .
7.1. Выделение Мп-пероксидазы В. adusta 72
7.2. Биохимические характеристики и субстратная специфичность Мп-пероксидазы В. adusta 75
ГЛАВА 8. Участие ферулоилэстеразы в биотрансформации лигнинсодержащих субстратов 80
8.1. Скрининг препаратов грибов класса Deuteromycetes на ферулоилэстеразную активность 80
8.2. Выделение ферулоилэстеразы A. heteromorphus 81
8.3. Субстратная специфичность и биохимические характеристики ферулоилэстеразы A. heteromorphus 87
8.4. Действие ферулоилэстеразы A. heteromorphus на природные лигнинсодержащие субстраты 88
8.5. Выделение ксиланазы A. heteromorphus 95
8.6. Субстратная специфичность и биохимические характеристики ксиланазы A. heteromorphus 96
8.7. Синергитическое действие ферулоилэстеразы и ксиланазы A. heteromorphus при гидролизе пшеничных отрубей 100
Выводы 103
Список литературы
