Введение
ГЛАВА 1 Обзор литературы 9
1.1 Полимерные сорбенты и носители для выделения биологически активных веществ 9
1.2. Полимерные сетчатые сорбенты, применяемые для сорбции макромолекул 10
1.3. Макропористые сорбенты 13
1.4. Гетеросетчатые сорбенты 14
1.5. Макросетчатые сорбенты 16
1.6. Новые подходы к синтезу сорбентов 17
1.7. Особенности при использовании сорбционных методов при выделении и очистке белков 24
1.8. Виды хроматографических процессов. Ионообменная и гидрофобная хроматография 25
1.9. Термодинамический и кинетико-динамический анализ сорбционных процессов. 30
1.10. Модификация биологически активных веществ 38
ГЛАВА 2 Материалы и методы исследования 46
2.1. Структура и свойства панкреатической дезоксирибонуклеазы 46
2.2. Структура и свойства цитохрома С 47
2.3. Физико-химические характеристики сорбентов 49
2.4. Физико-химические характеристики применяемых ПАВ. 50
2.5. Носители для иммобилизации 51
2.6. Свойства хлоргексидина биглюконата 52
2.7. Определения концентрации белка по методу Лоури 53
2.8. Определение концентрации белка по методу с биуретовым реактивом (связыванием с Кумасси синим) 54
2.9. Определение ферментативной активности ДНК-азы в растворе 55
2.10. Количественное определение цитохрома С 57
2.11. Гельхроматографический анализ 57
2.12. Метод определения концентрации хлоргексидинабиглюконата 58
2.13. Метод кислотно-щелочной обработки сорбентов 58
2.14. Модификация сорбентов 59
2.15. Методика по изучению комплексов с липосомами и гликосферами 59
2.16. Исследование сорбции белков в статических условиях (рН-зависимость и изотермические процессы сорбции) 60
2.17. Исследование кинетики сорбции белков 61
2.18. Проведение процесса сорбции и десорбции в динамических условиях 62
2.19. Статистическая обработка результатов 62
ГЛАВА 3 Изучение равновесных и кинетических параметров сорбции ферментов на различных хроматографических носителях 63
3.1. Сорбция ферментов на ионогенных и молекулярном сорбентах с модифицированной и немодифицированной поверхностью 64
3.2. Термодинамический анализ сорбции 70
3.3. Кинетический анализ сорбции 75
ГЛАВА 4 Исследование динамических процессов сорбции и десорбции 80
4.1. Теоретический анализ условий оптимизации. Изучение влияния скорости подвижной фазы на процесс сорбции ферментов из многокомпонентной смеси 80
4.2. Изучение динамического процесса выделения цитохрома С на сульфокатионитах КУ-23 и С-160 90
4.3. Изучение динамического процесса выделения ДНК-азы на сульфокатионитах КУ-23 и С-160 92
4.4. Разработка гибкой технологической схемы выделения и очистки цитохрома С и ДНК-азы на сульфокатионите КУ-23 95
ГЛАВА 5 Модификация панкреатической днк-азы с целью создания новых готовых лекарственных форм 97
5.1. Изучение влияния антисептика, липосом и глигосфер на активность ДНК-азы 97
5.2. Изучение процесса связывания ДНК-азы с наноматериалами и хлоргексидином по кинетике диффузии через пористые мембраны 100
5.3. Изучение процесса связывания фермента с антисептиком 103
5.4. Изучение процесса связывания фермента с липосомами и гликосферами 104
5.5. Влияние гликосфер на стабильность активности ДНК-азы в растворе 107
5.6. Салфетки медицинские для обработки воспаленных участков кожи, слизистой, а также профилактики герпетических высыпаний «Герпестоп»108
Заключение 113
Список литературы 115
