Введение
2. Литературный обзор 10
2.1 Спектроскопия ядерного магнитного резонанса 13
2.1.1 Физические основы ЯМР-спектроскопии 13
2.1.2 Современная спектроскопия ЯМР в исследовании бактериальных углеводов .25
2.2 Масс-спектрометрия . 39
2.2.1 Номенклатура разрывов связей в олигосахаридах 40
2.2.2 Типы анализаторов, используемые в современных масс-спектрометрах 41
2.2.3 Масс-спектрометрия с ионизацией бомбардировкой быстрыми атомами ...42
2.2.4 Масс-спектрометрия с ионизацией лазерной десорбцией из матрицы 47
2.2.5 Масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением 54
3. Результаты и обсуждение 61
3.1 Установление строения о-полисахаридов бактерий рода Protevs62
3.1.1 Полисахариды, содержащие гексуроновые и нонулозоновую кислоты 62
3.1.1.1 Proteus mirabilis 09 62:
3.1.1.2 Proteus vulgaris 037 65
3.1.1.3 Proteus mirabilis O50 „ 66
3.1.1.4 Proteus vulgaris 055 67
3.1.1.5 Proteus vulgaris ОЪ9 68
3.1.2 Полисахариды, содержащие фосфатные группы 70
3.1.2.1 ProteuspenneriO\9 71
3.1.2.2 Proteus penneriOeS 72
3.1.2.3 Proteus mirabilis ОАО 73
3.1.2.4 Proteus mirabilis 018 74
3.1.3 Полисахариды, содержащие остатки неуглеводных органических кислот...75
3.1.3.1 Proteus mirabilis 07 76
3.1.3.2 Proteus mirabilis ОАЭ 79
3.1.3.3 Proteus mirabilis 038 81
3.1.3.4 Proteus penneri 031 85
3.1.3.5 Proteus myxocfadens O60 87
3.1.4 Нейтральные полисахариды 88
3.1.4.1 Proteus mirabilis O20 88
3.1.5 Значение данных о строении О-полисахаридов для классификации Proteus..89
3.2 Установление строения коралпс бактерий рода Proteus 97
3.2.1 Подготовка образцов и выбор метода исследования 99
3.2.2 ESI-FT-ICR-масс-спектры с регистрацией катионов и анионов 100
3.2.2 Эксперимент IRMPD MS /MS с регистрацией отрицательно анонов 102
3.2.3 CSD-масс-спектрометрия с регистрацией катионов 104
3.2.4 Установление полной структуры олигосахаридов кора 107
3.2.5 Обсуждение результатов структурного исследования кора Proteus. Ill
4. Экспериментальная часть 116
4.1 Бактериальные штаммы, выращивание бактерий и выделение ЛПС 116
4.2 Деградация липополисахаридов 116
4.2.1 Мягкий кислотный гидролиз
4.2.2 О-Дезацилирование 118
4.2.3 Дезаминирование 118
4.3 Химические модификации и избирательное расщепление 119
4.3.1 О-Дезацетилирование 119
4.3.2 Дефосфорилирование 119
4.3.3 Восстановление карбоксильных групп 119
4.3.4 Сольволиз безводным фтористым водородом 119
4.3.5 Сольволиз трифторметансульфокислотой 120
4.3.6 Парциальный кислотный гидролиз 120
4.3.7 Дезаминирование 120
4.4 опРеделение состава полисахаридов. 120
4.4.1. Ионообменная хроматография 120
4.4.2 Газо-жидкостная хроматография 121
4.5 Определение абсолютных конфигураций компонентов 121
4.6 Анализ методом метилирования. 122
4.7 Инструментальные методы анализа 123
4.7.1 Масс-спектрометрия „123
4.7.3 Спектроскопия ЯМР 124
Выводы 125
Список литературы 126
Приложения 144
Приложение І 144
Приложение II 153
Приложение III 158
