Введение
1. Введение
2. Обзор литературы
2.1. Распределение (TTAGGG)n повторов в хромосомах разных видов позвоночных.
2.2 Теломеры млекопитающих: структура и функции .
2.3. Внутрихромосомная локализация (TTAGGG)n повторов.
2.4. Классификация внутрихромосомных (TTAGGG)n сайтов и внутрихромосомных (TTAGGG)n повторов.
2.5. Структура и нестабильность внутрихромосомных (TTAGGG)n последовательностей в клетках китайского хомячка.
2.6. Гипотезы происхождения внутрихромосомных (TTAGGG)n повторов.
2.7. Нестабильность внутрихромосомных (TTAGGG)n повторов.
2.8. Строение теломерных белков TRF1 и TRF2.
2.9. Функции теломерных белков TRF1 и TRF2.
2.10. Строение и функция белка танкираза 1, участвующего в регулировании функции теломер.
2.11. Белок Ки и его роль в защите теломер от слияния хромосомных концов.
2.12. Теломеро-связывающий комплекс, выделенный из спермы человека.
3. Материалы и методы
3.1. Линии клеток, использованные в работе.
3.2. Ревертазно-транскрипционная полимеразная цепная реакция (РТ-ПЦР) и клонирование ПЦР-фрагмента в плазмидные вектора .
3.3. Трансформация бактериальных штаммов.
3.4. Выделение плазмидной ДНК, определение ориентации встроенного гена TRF1.
3.5. Трансфекция клеток.
3.6. Вестерн - блот - анализ.
3.7. Иммунофлуоресцентный анализ.
3.8. Приготовление метафазных пластинок хромосом.
3.9. Флуоресцентная in situ гибридизация (FISH).
3.10. Перераспределение флуоресценции после выжигания лазером (FRAP).
3.11. Обработка клеток вортманнином (WM).
3.12. Микроскопия и анализ изображений.
4. Результаты и обсуждение
4.1. Клонирование человеческого гена TRF1.
4.2. Визуализация белка TRF1-V5 в клетках линий CV-1 и белка GFP-TRF1 в клетках линии А549.
4.3. Визуализация белка GFP-TRF1 в интерфазных ядрах КХ клеточных линий СНО-К1 и V79.
4.4. Локализация белка GFP-TRF1 в интерфазных ядрах и метафазных хромосомах клеток китайского хомячка.
4.5. Одновременная визуализация белка GFP-TRF1 и двунитевых разрывов в облученных клетках китайского хомячка.
4.6. Диффузионная подвижность белка GFP-TRF1 в живых клетках V79 и ее изменение воздействием вортманнина.
4.7. Обработка клеток V79 вортманнином повышает частоту спонтанных и индуцированных блеомицином хромосомных аберраций.
4.8. Совместная визуализация белка GFP-TRF1 и белка танкиразы 1 в клетках китайского хомячка.
4.9. Экспрессия танкиразы 1 приводит к возрастанию частоты спонтанных хромосомных аберраций в клетках китайского хомячка.
Выводы
