Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Способы удаления антиуглеводных антител 11
1.1.1. Лекарственная терапия 12
1.1.2. Инфузия анти-aGal антител 13
1.1.3. Экстракорпоральная терапия 14
1.1.4. Поиск новых аффинных сорбентов 18
1.2. Способы доставки ДНК в клетку для разработки ДНК-вакцин 19
1.2.1. Электропорация 22
1.2.2. Введение ДНК с помощью микроинъекции 23
1.2.3. Метод "генной пушки" 23
1.2.4. Введение нативной ДНК с помощью прямых инъекций 24
1.2.5. Введение ДНК с помощью различных транспортных систем 24
1.2.5.1. Вирусные векторы 24
1.2.5.2. Белковые и пептидные векторы 25
1.2.5.3. Введение ДНК с использованием липосом 26
1.2.5.4. Введение ДНК, включенной в полимерных микрочастицы и микрокапсулы 27
1.3.Капсулирование 29
1.3.1. Микрокапсулы 29
1.3.2. Полимерные носители 32
1.3.2.1. Природные полисахариды 33
1.3.3. Методы микрокапсулирования 39
1.3.3.1. Химические методы микрокапсулирования 40
1.3.3.2. Физические методы микрокапсулирования 41
1.3.3.3. Физико-механические методы микрокапсулирования 43
1.3.4. Полиэлекролитные микрокапсулы 46
1.3.4.1. Метод послойной адсорбции полиэлектролитов 47
1.3.4.2. Получение микрокапсул с помощью гелеобразования 48
1.4. Заключение по обзору литературы 50
Глава 2. Материалы, оборудование и методы исследования 52
2.1. Материалы и реактивы 52
2.2. Лабораторное оборудование 54
2.3. Методы получения и исследования 55
2.3.1. Получение модифицированных декстранов 55
2.3.2. Определение молекулярной массы модифицированных декстранов 56
2.3.3. Определение степени замещения модифицированных декстранов 57
2.3.4. Получение альгинат-поликатионных микросфер 57
2.3.5. Определение толщины мембраны микросфер 59
2.3.6. Определение эффективности включения гликоконъюгата в микросферы 59
2.3.7. Изучение эффективности сорбции антител микросферами с различной толщиной ПЭ мембраны 60
2.3.8. Сравнение способности альгинат-хитозановых микрочастиц и сефарозы специфически связывать антиуглеводные антитела 61
2.3.9. Проведение ИФА 61
2.3.10. Исследование гемосовместимости микрочастиц 62
2.3.10.1. Изучение морфологии и концентрации форменных элементов крови 62
2.3.10.2. Исследование гемолиза эритроцитов 62
2.3.10.3. Определение фрагмента СЗа 63
2.3.11. Получение микрочастиц карбоната кальция 63
2.3.12. Изучение сорбционной емкости микрочастиц СаСОэ 64
2.3.13. Включение ДНК в микрочастицы СаС03 64
2.3.14. Получение микрокапсул на основе микрочастиц СаСОз методом послойной адсорбции полиэлектролитов 64
2.3.15. Оценка эффективности введения вирусной ДНК, включенной в (ПЛ/АЛГ)з микрокапсулы, в клетки в модели in vitro 66
2.3.16. Изучение доставки вирусной ДНК, включенной в (ПЛ/АЛГ)3 микрокапсулы, в клетки в модели in vivo 66
2.3.17. Оценка эффективности доставки микрокапсулированных форм плазмидных ДНК в моделях in vivo 67
Глава 3. Результаты и обсуждение 69
3.1. Выбор полимеров для получения полиэлектролитных биосовместимых микросфер 69
3.2. Включение антигенов в биосовместимые альгинат-хитозановые микросферы для специфического удаления антиуглеводных антител 71
3.2.1 Выбор антигенов 71
3.2.2. Выбор метода иммобилизации антигенов 72
3.2.3. Характеристика альгинат-хитозановых носителей 73
3.2.4. Изучение эффективности включения гликоконъюгатов в микросферы 79
3.2.5. Изучение эффективности сорбции антител микросферами 81
3.2.6 Сравнение способности альгинат-хитозановых микрочастиц и сефарозы специфически связывать антиуглеводные антитела 84
3.2.7. Изучение гемосовместимости микросфер 85
3.2.7.1. Изучение морфологии и концентрации форменных элементов крови 86
3.2.7.2. Исследование гемолиза эритроцитов 89
3.2.7.3. Определение фрагмента СЗа 90
3.3. Включение ДНК в биосовместимые полимерные микрокапсулы 91
3.3.1. Выбор материалов и метода для включения ДНК 91
3.3.2 Изучение сорбционной емкости микрочастиц СаС03 93
3.3.3. Подбор полиэлектролитов для получения мультислойных микрокапсул 95
3.3.4. Исследование доставки вирусной ДНК, включённой в (ПЛ/АЛГ) микрокапсулы, в клетки в модели in vitro и in vivo 97
3.3.5. Исследование доставки плазмидных ДНК, включённых в микрокапсулы различного полимерного состава, в модели in vivo... 100
Выводы 106
Благодарности 108
Список литературы 109
