Введение
1. Обзор литератур 1.1.
Система окислительного фосфорилирования митохондрии растении 16
1.1.1. Комплекс 1 17
1.1.2. Комплекс II 18
1.1.3. Комплекс III 20
1.1.4. Комплекс IV 21
1.1.5. Комплекс V 24
1.1.6. Альтернативные ферменты 24
1.1.7. Убихинон и цитохром с 26
1.2. Надмолекулярная организация системы oxphos митохондрий растений 27
1.2.1. Суперкомплекс І+ІІІ2 29
1.2.2. Суперкомплекс III2+IV 31
1.2.3. Суперкомплекс I+III2+IV 32
1.2.4. Димерная АТФ-синтаза 1.3.
Стабилизация суперкомплексов системы окислительного фосфорилирования 36
1.4. Функциональная роль суперкомплексов системы oxphos митохондри 40
1.5. Влияние стрессовых факторов среды на организацию и активность этц растений и возможные функции суперкомплексов при стрессе 43
1.6. Влияние низкой температуры на митохондрии растени. 46
1.7. Выводы из обзора литературы 53
2. Объект и методы исследования 57
2.1. Объект исследования 57
2.2. Условия выращивания 57
2.3. Температурная обработка 57
2.4. Оценка относительной морозостойкости проростков 58
2.5. Определение содержания продуктов перекисного окисления липидов 59
2.6. Выделение митохондрий 60
2.7. Очистка митохондрий 61
2.8. Определение целостности и качества очищенной митохондриальной фракции 61
2.8.1. Электронная микроскопия 62
2.8.2. Тест на доступность цитохрома с 62
2.8.3. Полярографический анализ активности митохондрий 63
2.9. Солюбилизация митохондриальных нативных белковых комплексов 64
2.10. Определение концентрации белка 64
2.11. Одномерный голубой нативный электрофорез (id bne) 65
2.12. Двумерный голубой нативный электрофорез с нативной второй мерой (2d bne/bne) 66
2.13. Двумерный голубой нативный электрофорез с денатурирующей второй мерой с использованием додецилсульфата натрия (2d bne/sds) 67
2.14. Окраска и обесцвечивание гелей 68
2.15. Вестерн-блоттинг 69
2.16. Используемые антитела 70
2.17. Определение молекулярных масс белков 70
2.18. Детекция активности дыхательных ферментов в геле 71
2.19. Анализ гелей в программе image j 72
2.20. Масс-спектрометрическии анализ 72
2.21. Статистическая обработка результатов 73
3. Результаты и обсуждение 74
3.1. Чистота и качество изучаемых фракций митохондрий 74
3.1.1. Интактность и функциональная активность митохондрий проростков
3.2. Организация системы окислительного фосфорилирования митохондрий проростков гороха 81
3.2.1. Энзимография комплексов системы окислительного фосфорилирования митохондрий гороха в нативном голубом одномерном геле 1D BNE 82
3.2.2. Детекция митохондриальных дыхательных комплексов и АТФ-синтазы на двумерных градиентных нативных гелях 2D BNE/BNE 88
3.2.3. Анализ субъединичного состава суперкомплексов и комплексов системы окислительного фосфорилирования митохондрий проростков гороха при помощи иммунохимии и масс-спектрометрии двумерных гелей 2D BNE/SDS 91
3.3. Влияние низких температур на состав, содержание и активность компонентов системы окислительного фосфорилирования митохондрий проростков гороха... 101
3.3.1. Оценка физиологического состояния растений в изучаемых условиях гипотермии 103
3.3.2. Влияние гипотермии различной интенсивности на состав суперкомплексов, комплексов системы окислительного фосфорилирования в митохондриях проростков гороха
3.3.3. Активность дыхательных монокомплексов и комплексов в составе суперкомплексов системы окислительного фосфорилирования митохондрий проростков гороха в условиях гипотермии
Заключение
Выводы
Список литературы
