Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1 Гепатоцеллюлярная карцинома 11
1.2 Клеточное строение печени в норме и при развитии ГЦК 13
1.3 Гетерогенность опухолевой ткани 17
1.4 Эпителио-мезенхимный переход в процессе канцерогенеза 19
1.5 Влияние микроокружения на рост опухоли 21
1.6 Изменение внеклеточного матрикса при канцерогенезе 22
1.7 Молекулярные пути канцерогенеза 25
1.8 Сигнальный путь инсулиноподобных факторов роста 28
1.9 IGF-1 и IGF-связывающие белки при канцерогенезе 31
1.10 Моделирование гепатоцеллюлярной карциномы у мышей 33
Глава 2. Материалы и методы 38
2.1 Моделирование химически индуцированной гепатоцеллюлярной карциномы у мышей 38
2.2 Стратегия отбора экспериментального материала 39
2.3 Гистологический анализ 39
2.4 Получение первичных клеточных культур гепатоцеллюлярной карциномы мыши 40
2.5 Выделение тотальной РНК из ткани печени и клеточных культур ГЦК 41
2.6 Синтез кДНК библиотек 42
2.7 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ПЦР в реальном времени 43
2.8 Статистическая обработка результатов, полученных методом ПЦР в реальном времени 44
2.9 Выявление белков методом Вестерн-блот 46
2.10 Иммуноцитохимическое окрашивание клеточных культур ГЦК 47
Глава 3. Результаты 49
3.1 Модель гепатоцеллюлярной карциномы мыши 49
3.2 Гистологический анализ ткани при развитии гепатоцеллюлярной карциномы мыши 50
3.3 Экспрессия мРНК гена Igf-1R в динамике развития гепатоцеллюлярной карциномы мыши 52
3.4 Экспрессии мРНК генов Igfbp1 – Igfbp-7 в динамике развития гепатоцеллюлярной карциномы мыши 53
3.5 Получение первичных клеточных культур из опухолевой ткани гепатоцеллюлярной карциномы 56
3.6 Экспрессия генов Vimentin и CD44 в первичных культурах ГЦК 59
3.7 Паттерн экспрессии Igf-1, Igf-1R, Igfbp-1 – Igfbp-7 в первичных культурах гепатоцеллюлярной карциномы мыши 61
3.8 Анализ первичных культур ГЦК на маркеры эпителио-мезенхимного перехода 63
3.9 Анализ экспрессии транскрипционных факторов, участвующих в эпителио-мезенхимном переходе в первичных культурах ГЦК 64
3.10 Паттерн экспрессии генов, регулирующих синтез, связывание и деградацию гиалуроновой кислоты в первичных культурах ГЦК 65
3.11 Выявление белков-маркеров ГЦК методом вестерн-блот на первичных культурах ГЦК 67
3.12 Выявление белков CD44 и Has2 методом иммуноцитохимии 67
3.13 Экспрессия Tgf-1 и Tgf-1R в первичных культурах ГЦК под воздействием факторов TGF- и IL-6 69
3.14 Изменение экспрессии маркеров эпителио-мезенхимного перехода в первичных культурах ГЦК под воздействием факторов TGF- и IL-6.71
3.15 Выявление белка CD44 в первичной культуре ГЦК под воздействием смеси факторов TGF- и IL-6 72
Глава 4. Обсуждение результатов 74
4.1 Связь лиганд Igf-1 – рецептор Igf-1R в динамике развития гепатоцеллюлярной карциномы 74
4.2 Паттерн экспрессии мРНК генов Igfbp1 – Igfbp-7 в динамике развития гепатоцеллюлярной карциномы мыши 76
4.3 Молекулярная характеристика первичных клеточных культур гепатоцеллюлярной карциномы мыши 80
4.4 Паттерн экспрессии Igf-1, Igf-1R, Igfbp-1 – Igfbp-7 в первичных культурах гепатоцеллюлярной карциномы мыши 81
4.5 Паттерн экспрессии генов, регулирующих синтез, связывание и деградацию гиалуроновой кислоты 81
4.6 Анализ первичных культур ГЦК на экспрессию генов, участвующих в процессе эпителио-мезенхимного перехода 83
4.7 Смена клеточного фенотипа первичных культур ГЦК под воздействием TGF- и IL-6 85
Заключение 87
Выводы 88
Список литературы 89
Список публикаций и тезисов 110
