Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1. Природные регуляторные пептиды 14
1.1.1. Общая характеристика 14
1.1.2. Классификация регуляторных пептидов 19
1.1.2.1. Нейропептиды 19
1.1.2.2. Пептиды желудочно-кишечного тракта 27
1.1.2.3. Регуляторные пептиды иммунной системы 30
1.1.2.4. Атриопептиды 32
1.2. Тафтцин 33
1.2.1. Общая характеристика тафтцина 33
1.2.2. Действие тафтцина на иммунную систему 35
1.2.3. Действие тафтцина на ЦНС 36
1.2.4. Противоопухолевое действие тафтцина 38
1.3. Синтетический регуляторный селективный анксиолитик селанк 39
1.3.1. Синтетические регуляторные пептиды 39
1.3.2. Структура селанка 43
1.3.3. Анксиолитическое действие селанка 43
1.3.4. Действие селанка на ЦНС 48
1.3.5. Действие селанка на иммунную систему 51
1.3.6. Другие свойства селанка 52
1.4. Подходы к изучению механизма действия регуляторных пептидов 54
1.4.1. Физиологические методы 54
1.4.1.1. Классификация экспериментальных моделей 54
1.4.1.2. Физиологические методы оценки влияния регуляторных пептидов на поведение животных 55
1.4.2. Биохимические методы 58
1.4.2.1. Изучение биодеградации регуляторных пептидов 58
1.4.2.2. Поиск взаимодействий регуляторных пептидов с рецепторами 59
1.4.3. Молекулярно-биологические методы 60
1.4.3.1. Анализ экспрессии генов на уровне мРНК 60
1.4.3.2. Анализ экспрессии генов на уровне белка 63
Глава 2. Материалы и методы 65
2.1. Приготовление и хранение препаратов селанка 65
2.2. Анализ влияния однократного и курсового введения селанка на экспрессию генов в мозге и селезёнке крысы 65
2.2.1. Характеристика экспериментальных групп животных 65
2.2.2. Выделение тотальной РНК из тканей мозга и селезёнки крысы 67
2.2.3. Оценка уровня экспрессии мРНК генов в гиппокампе крысы с использованием кДНК-микрочипов 68
2.2.4. Оценка уровня экспрессии мРНК генов Actnl, Fg/7, СхЗсгІ, Ptprnl, Slc6a20 в гиппокампе, лобной коре, мозжечке и селезёнке крысы 69
2.2.5. Статистическая оценка результатов 71
2.3. Анализ влияния селанка и его фрагментов на экспрессию генов, вовлеченных в процессы воспаления, в селезёнке мыши 72
2.3.1. Характеристика экспериментальных групп животных 72
2.3.2. Выделение тотальной РНК из тканей селезёнки мыши 73
2.3.3. Оценка уровня экспрессии мРНК генов, вовлеченных в процессы воспаления, в селезёнке мыши под действием селанка ] и его фрагментов с использованием ПЦР-чипов 74
2.3.4. Статистическая оценка результатов 78
2.4. Временная динамика экспрессии мРНК гена Вс16, генов мишеней и генов-корепрессоров белка BCL6 в селезёнке мыши под действием селанкаи его фрагментов 78
2.4.1. Характеристика экспериментальных групп животных 78
2.4.2. Выделение тотальной РНК из тканей селезёнки мыши 79
2.4.3. Оценка уровня экспрессии мРНК гена Всіб, генов-мишеней и генов-корепрессоров белка BCL6 в селезёнке мыши под действием селанка и его фрагментов 79
2.4.4. Статистическая оценка результатов 80
Глава 3. Результаты исследования 81
3.1. Анализ влияния однократного и курсового введения селанка на изменение транскриптома клеток мозга и селезёнки крысы 81
3.1.1. Анализ влияния однократного и курсового введения селанка на изменение транскриптома клеток гиппокампа крысы с использованием кДНК-микрочипов 81
3.1.2. Анализ влияния однократного и курсового введения селанка на изменение экспрессии генов Actnl, СхЗсгІ, Fg/7, Ptprn2 и Slc6a20 в гиппокампе, лобной коре и мозжечке крысы 86
3.1.3. Анализ влияния однократного и курсового введения селанка на изменение экспрессии генов Actnl, СхЗсгІ, Fgf7, Ptprn2 uSlc6a20n селезёнке крысы 91
3.2. Анализ влияния селанка и его фрагментов (тафтцина, ArgPGP и GP) на экспрессию генов, вовлеченных в процессы воспаления, в селезёнке мыши через 6 и 24 часа после введения 94
3.3. Временная динамика экспрессии гена Всіб, генов-мишеней и генов-корепрессоров белка BCL6 в селезёнке мыши под действием селанка и его фрагментов 98
3.3.1. Временная динамика экспрессии гена Всіб под действием селанкаи его фрагментов 98
3.3.2. Временная динамика экспрессии генов-мишеней белка BCL6 под действием селанка и его фрагментов 100
3.3.3. Временная динамика экспрессии генов-корепрессоров белка BCL6 под действием селанка и его фрагментов 101
Глава 4. Обсуждение результатов 104
4.1. Влияние однократного и курсового введения селанка на изменение транскриптома клеток мозга и селезёнки крысы 104
4.1.1. Влияние однократного и курсового введения селанка на изменение транскриптома клеток гиппокампа крысы 104
4.1.2. Влияние однократного и курсового введения селанка на изменение экспрессии генов Actnl, СхЗсгІ, Fgf7, Ptprn2 и Slc6a2C в гиппокампе, лобной коре, мозжечке и селезёнке крысы 113
4.2. Изменение экспрессии генов, вовлеченных в процессы воспаления, под действием селанка и его фрагментов в селезёнке мыши 116
4.3. Временная динамика экспрессии гена Всіб, генов-мишеней и генов-корепрессоров белка BCL6 в селезёнке мыши под действием селанка и его фрагментов 122
Заключение 127
Выводы 129
Список литературы 131
Публикации по теме диссертации 159
