Введение
1. Обзор литературы 9
1.1 Структура пероксидазы. 9
1.2 Физико-химические свойства растительных пероксидаз . 13
1.3 Распространение и субклеточная локализация пероксидазы. 14
1.4 Биологическая и физиологическая роль пероксидазы. 17
1.4.1 Возможные механизмы участия пероксидазы в формировании ответных реакций на действие различных стресс-факторов . 26
1.5 Биосинтез пероксидазы 30
1.6 Молекулярная гетерогенность пероксидазы. 35
1.7 Механизм действия пероксидазы. 40
2 Материалы и методы исследования 45
2.1 Объекты исследования и метод культивирования ткани 45
2.2 Выделение цитоплазматической фракции пероксидазы из культуры ткани Rauwolfia serpentina 45
2.3 Выделение и очистка пероксидазы из культуры ткани Rauwolfia serpentina. 46
2.4 Определение концентрации белка 46
2.5 Определение активности пероксидазы 47
2.6 Электрофоретические методы 47
2.6.1 Электрофорез в пластинах полиакриламидного геля 47
2.6.2 Определение активности пероксидазы в геле 48
2.7 Иммунологические методы 49
2.7.1 Получение антисыворотки к пероксидазе 49
2.7.2 Радиальная иммунодиффузия в агаровом геле 50
2.7.3 Определение концентрации антигена 50
2.8 Радиоиммунонлогические методы 51
2.8.1 Определение параметров кругооборота пероксидазы и общего белка 51
2.9 Статистическая обработка результатов эксперимента. 52
3 Результаты исследования 52
3.1 Активность пероксидазы и концентрация белка в динамике роста Rauwolfia serpentina, штамм К-47 52
3.1.1 Подбор оптимальных условий определения активности 55
3.2 Изучение кинетики пероксидазы на разных этапах роста каллусной культуры Rauwolfia serpentina. 56
3.3 Молекулярная гетерогенность пероксидазы в процессе культивирования штамма Rauwolfia serpentina. 56
3.4 Выделение и очистка пероксидазы из культуры ткани Rauwolfia serpentina. 57
3.4.1 Подбор оптимальных условий высаливания 58
3.5 Определение молекулярной массы пероксидазы, влияние температуры и рН на ее активность. 62
3.5.1 Влияние температуры и рН на активность пероксидазы. 64
3.6. Изучение параметров обмена пероксидазы и общего белка в культуре ткани Rauwolfia serpentina 64
3.7 Исследование специфичности антипероксидазной сыворотки 66
3.8 Влияние высоко- и низкотемпературного шока на активность и кинетические параметры пероксидазы в культуре ткани Rauwolfia serpentina. 67
3.8.1. Влияние температурного шока на кинетические параметры пероксидазы 70
3.9 Молекулярная гетерогенность пероксидазы при высоко- и низкотемпературном шоке. 71
3.10 Обмен внутриклеточного белка и пероксидазы в культуре ткани Rauwolfia serpentina 72
4. Обсуждение результатов 75
5. Выводы
6. Список литературы
