Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Стволовые клетки 11
1.1.1. Эмбриональные стволовые клетки. 12
1.1.2. Стволовые клетки дифференцированных тканей взрослого организма. 14
1.1.3. Мезенхимные стволовые клетки. 21
1.2. Терапия инфаркта миокарда 35
1.2.1. Инфаркт миокарда 35
1.2.2. Терапевтические подходы к лечению инфаркта миокарда 37
1.2.3. Стимуляция эндогенной регенерации миокарда. 38
1.2.4. Трансплантация фетальных и неонатальных кардиомиоцитов. 40
1.2.5. Реимплантация миобластов в область повреждения 41
1.2.6. Мобилизация эндогенных стволовых клеток. 42
1.2.7. Клеточная терапия повреждений миокарда с применением мононуклеарной фракции костного мозга 43
1.2.8. Клеточная терапия повреждения миокарда с применением ГСК. 44
1.2.9. Клеточная терапия повреждений миокарда с применением МСК. 45
ГЛАВА 2. Материал и методика 49
2.1. Выделение и культивирование МСК крысы 49
2.2. Фенотипирование МСК крысы 49
2.3. Дифференцировка МСК крысы в ортодоксальных направлениях 50
2.3.1. Дифференцировка МСК крысы в остеоцитарном направлении 50
2.3.2. Дифференцировка МСК крысы в хондроцитарном направлении. 50
2.3.3. Дифференцировка МСК крысы в адипоцитарном направлении. 50
2.4. Дифференцировка МСК крысы в кардиомиоцитарном направлении 51
2.5. Фенотипирование дифференцированных производных МСК 51
2.6. Окрашивание мезенхимных стволовых клеток крысы флуорохромом РКН 26 .51
2.7. Моделирование экспериментального инфаркта миокарда (ЭИМ) 53
2.8. Введение МСК животным 53
2.9. Фиксация материала, морфологический и гистологический анализ препаратов. 54
2.10. Иммуногистохимическое окрашивание препаратов миокарда 55
2.10.1. Иммуногистохимическое окрашивание препаратов миокарда антителами против коннексина 55
2.10.2. Иммуногистохимическое окрашивание препаратов миокарда антителами против транскрипционного фактора GATA4 и тропонина I. 57
2.11. Анализ распределения МСК в организме подопытных и интактных животных 57
2.12. Анализ распределения лизата МСК, окрашенных РКН26, в миокарде подопытных животных 58
2.13. Количественная оценка васкуляризации зоны повреждения и измерение дилатации полостей сердца 59
ГЛАВА 3 Результаты 60
3.1. Мезенхимные стволовые клетки 60
3.1.1. Характеристика культур МСК крыс. 60
3.1.2. Дифференцировка мезенхимных стволовых клеток в трёх ортодоксальных направлениях и фенотипирование полученных производных 61
3.1.3. Дифференцировка МСК в кардиомиоцитарном направлении 64
3.2. Динамика экспериментального инфаркта миокарда у крыс линии Wistar Kyoto. 65
3.2.1. Четвертые сутки после ЭИМ. 65
3.2.2. Седьмые сутки после операции ЭИМ. 65
3.2.3. Двадцать первые сутки после ЭИМ. 66
3.2.4. Тридцать пятые сутки после ЭИМ. 66
3.2.5. Сорок вторые сутки после операции ЭИМ. 69
3.3. Распределение МСК по организму интактных и подопытных животных 71
3.3.1. Распределение МСК в организме интактного животного ЭИМ. 71
3.3.2. Распределение МСК в организме животного перенесшего ЭИМ. 71
3.3.3. Трансплантация лизата мезенхимных стволовых клеток животным с ЭИМ. 74
3.4. Динамика течения экспериментального инфаркта миокарда после трансплантации МСК 76
3.4.1. Детекция донорских клеток в миокарде интактных и подопытных животных. 76
3.4.2. Морфологические особенности в строении ткани в зоне инфаркта миокарда у подопытных животных 78
3.4.3. Выявление кардиомиоцитов периинфарктной зоны окрашенных РКН26. 85
3.5. Сравнение степени дилатации полостей сердца у контрольных и подопытных животных после ЭИМ 87
3.6. Анализ васкуляризации зоны ишемического повреждения у контрольных и подопытных животных 87
3.7. Регистрация изменений электрокардиограмм у контрольных и подопытных (с введенными МСК) животных после ЭИМ 89
3.8. Влияние сроков внутривенного введения мезенхимных стволовых клеток при осложненном инфаркте 90
3.8.1. Детекция флуоресцентно окрашенных мезенхимных стволовых клеток 90
3.8.2. Особенности в строении рубцовой ткани при терапевтической трансплантации МСК. 90
3.8.3. Особенности в строении рубцовой ткани при профилактической трансплантации МСК. 96
3.9. Изменение морфометрических параметров миокарда у крыс с ЭИМ при разных сроках трансплантации МСК 100
ГЛАВА 4 Обсуждение 103
Выводы 117
Заключение 118
Список работ, опубликованных по теме диссертации 119
Благодарности 120
Список литературы 121
